[發明專利]超分子自組裝介導網狀納米金增強免疫層析試紙條靈敏度的新方法

有效

• 申請號: 201810139630.5
• 申請日: 2018-02-11
• 公開（公告）號: CN108459159B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 陳小元;黃小林;熊勇華
• 申請（專利權）人: 莎穆（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 劉俊玲

本發明提供了一種放大膠體金免疫層析比色信號強度的方法，包括：用金剛烷胺標記的牛血清白蛋白封閉金標抗體，得到金標抗體I；用β?環糊精合成膠體金納米粒子，得到β?環糊精包被的膠體金溶液；在使用金標抗體I執行雙抗夾心膠體金免疫層析的體系內加入待測樣品后，再加入所述β?環糊精包被的膠體金溶液；再在體系內多次重復加入5,10,15,20?四(4?羧基苯基)卟啉與β?環糊精包被的膠體金溶液的混合溶液。本發明的方法利用超分子自組裝原理介導形成網狀納米金，實現了循環信號放大，從而大大提高檢測線和質控線上金納米粒子的顯色強度，可實現對超低濃度目標檢測物進行現場快速檢測的目的。本發明還提供一種用于膠體金免疫層析法的高靈敏度試劑盒。

技術領域

本發明涉及免疫層析分析技術領域，進一步涉及膠體金免疫層析法中比色信號強度的放大方法及試紙條的改進，具體涉及一種基于超分子自組裝介導網狀納米金增強免疫層析分析靈敏度的新方法。

背景技術

膠體金免疫層析試紙條因其簡單、快速、方便以及裸眼檢測已被廣泛應用于臨床診斷、食品安全檢測以及環境監控等領域。傳統膠體金免疫層析試紙條主要采用粒徑為20～40nm膠體金作為信號探針，然而由于其較小的粒徑導致其比色信號強度相對偏弱，進而導致其檢測靈敏度偏低。相對較低的檢測靈敏度在一定程度上局限了其在超靈敏檢測中的應用。近些年，隨著納米科學和技術的快速發展，各種各樣的新型納米材料如熒光微球、量子點、量子點微球、上轉換熒光納米粒子、碳納米材料以及磁性材料已經被報道可用于替代膠體金作為檢測探針提高傳統免疫層析試紙條的檢測靈敏度，但這些納米探針的合成相對復雜，價格昂貴很難被市場推廣使用。相對于這些新型納米材料，膠體金因其合成簡單、易修飾、生物相容性好、光學性質穩定以及易讀取等優勢一直以來在免疫層析試紙條占據主要的位置，特別是在商業化生產中，其市場占有率達90％以上。因此，如何提高傳統膠體金免疫層析試紙條的檢測靈敏度對于進一步拓展其在超靈敏檢測中的應用具有重要意義。

現今，提高傳統膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法主要包括以下幾類：1)讀條儀的開發：通過優化膠體金免疫層析試紙條讀取儀信號采集、信號增強、以及數據處理等方面來提高其檢測靈敏度，如專利CN103018439A；2)金或銀染增強技術：在傳統膠體金免疫層析試紙條的基礎上，當還原劑存在的情況下，金或銀離子容易以膠體金為核心，聚集在膠體金表面還原成金或銀原子，使納米級大小的膠體金通過金或銀離子的聚集和還原生長為更大的顆粒，從而使膠體金的比色信號得到放大，如專利CN102135536A；3)酶增強技術：在傳統膠體金免疫層析試紙條的基礎上，通過引入辣根過氧化物酶或具有過氧化物酶活性的納米酶催化氧化相應的底物如四甲基聯苯胺(TMB)等生成有色的沉淀物沉積于檢測線，從而使膠體金的比色信號得到放大；4)雙金信號放大：在傳統膠體金免疫層析試紙條的基礎上，通過引入信號擴增金標墊，其可以借助抗原抗體反應和生物素-鏈霉親和素系統等特異性地在檢測線結合金標抗體偶聯物，導致膠體金納米粒子的進一步聚集，從而放大膠體金的比色信號，如專利CN102507929A；5)雜化金納米復合物：將膠體金納米粒子通過物理或化學方法結合到更大載體如磁性納米粒子、二氧化硅納米粒子等顆粒的表面，從而增加檢測線結合的膠體金數量，進而放大其檢測信號。雖然這些方法在一定程度上提高了傳統膠體金免疫層析試紙條的檢測靈敏度，但其提高檢測靈敏度的能力是有限的，僅為1～2個數量級。因此，增強后的膠體金免疫層析試紙條依然無法滿足超靈敏檢的要求。

發明內容

本發明旨在針對現有膠體金免疫層析試紙條因其20～40nm膠體金探針信號強度偏弱導致檢測靈敏度偏低的現狀缺陷，使用超分子自組裝介導網狀納米金形成，促使膠體金納米粒子在試紙條檢測線不斷積累，提供一種增強免疫層析分析靈敏度的新方法，實現對超低濃度目標檢測物進行現場快速檢測的目的。

為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案：

首先，本發明提供一種放大膠體金免疫層析比色信號強度的方法，包括：