[發明專利]抗病轉基因大豆事件B5B9104-3外源插入片段側翼序列及其應用

有效

• 申請號: 201810138923.1
• 申請日: 2018-02-03
• 公開（公告）號: CN108239641B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 牛陸;楊向東;董英山;邢國杰;楊靜;賀紅利;郭東全;錢雪燕;姚瑤
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.廣譜抗花葉病毒轉基因大豆事件B5B9104-3外源插入片段左邊界和右邊界側翼序列，其特征在于，外源插入片段左邊界側翼序列如SEQ-2所示，外源插入片段右邊界側翼序列如SEQ-3所示，由來源于大豆基因組序列和來源于外源插入片段序列組成的DNA序列；其中：

外源插入片段左邊界側翼序列特征包括：

(1)SEQ-2第1-480位點序列來源于栽培大豆品種沈農9號基因組序列；

(2)SEQ-2第481-1200位點序列來源于外源插入片段序列；

外源插入片段右邊界側翼序列特征包括：

(1)SEQ-3第1-582位點序列來源于外源插入片段序列；

(2)SEQ-3第583-1294位點序列來源于栽培大豆品種沈農9號基因組序列。

2.權利要求1所述外源插入片段左、右邊界側翼序列的制備方法，其特征在于，提取轉基因大豆事件B5B9104-3基因組DNA，利用基因組重測序技術分析確定外源片段插入位點，并通過PCR擴增獲得。

3.權利要求1所示側翼序列在建立轉基因大豆事件B5B9104-3特異性檢測方法或制備檢測試劑盒中的應用，其特征在于，依據權利要求1所示側翼序列，制備特異性引物或探針。

4.權利要求1所述側翼序列、權利要求3所述特異性檢測方法或檢測試劑盒在轉基因大豆事件B5B9104-3檢測中的應用，其中，檢測對象包括親本、衍生品系或品種，及其制品或產品。

5.權利要求3或權利要求4所述特異性檢測方法，其特征在于，其中一條引物為依據SEQ-2第1-480位點序列設計的正向引物，另一條引物為依據SEQ-2第481-1200位點序列設計的反向引物，即所述兩條引物組合為權利要求1所述外源插入片段左邊界側翼序列特異性檢測引物。

6.權利要求3或權利要求4所述試劑盒，其特征在于，其中一條引物為依據SEQ-2第1-480位點序列設計的正向引物，另一條引物為依據SEQ-2第481-1200位點序列設計的反向引物，即所述兩條引物組合為權利要求1所述外源插入片段左邊界側翼序列特異性檢測引物。

7.根據權利要求5所述外源插入片段左邊界側翼序列特異性檢測引物，其特征在于：如SEQ-4和SEQ-5所示：

所述正向引物SEQ-4為：5’-GAAAAAACACATTATTCCATGTGGAGAAG-3’

所述反向引物SEQ-5為：5’-TGAGCAACTTGAAATGATTTCAGAAACTTC-3’。

8.權利要求3或權利要求4所述特異性檢測方法，其特征在于，其中一條引物為依據SEQ-3第1-582位點序列設計的正向引物，另一條引物為依據SEQ-3第583-1294位點序列設計的反向引物，即所述兩條引物組合為權利要求1所述外源插入片段右邊界側翼序列特異性檢測引物。

9.權利要求3或權利要求4所述檢測試劑盒，其特征在于，其中一條引物為依據SEQ-3第1-582位點序列設計的正向引物，另一條引物為依據SEQ-3第583-1294位點序列設計的反向引物，即所述兩條引物組合為權利要求1所述外源插入片段右邊界側翼序列特異性檢測引物。

10.根據權利要求8所述外源插入片段右邊界側翼序列特異性檢測引物，其特征在于，如SEQ-6和SEQ-7所示：

所述正向引物SEQ-6為：5’-TTCCACACAACATACGAGCCG-3’

所述反向引物SEQ-7為：5’-TGGGGAAAAATACATATTAGAACACTG-3’。