[發(fā)明專利]高油酸轉(zhuǎn)基因大豆事件E2D8037-3外源插入片段側(cè)翼序列及其應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810138900.0 | 申請(qǐng)日： | 2018-02-03 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108456679B | 公開（公告）日： | 2021-07-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊向東;仲曉芳;楊靜;趙倩倩;杜娟;牛陸;邢國(guó)杰;賀紅利;郭東全;錢雪燕;姚瑤 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/11 | 分類號(hào)： | C12N15/11;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 130033 吉*** | 國(guó)省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 油酸 轉(zhuǎn)基因 大豆 事件 e2d8037 插入 片段 側(cè)翼 序列 及其 應(yīng)用 | ||
1.高油酸轉(zhuǎn)基因大豆事件E2D8037-3外源插入片段左邊界和右邊界側(cè)翼序列，其特征在于，外源插入片段左邊界側(cè)翼序列如SEQ-2所示，外源插入片段右邊界側(cè)翼序列如SEQ-3所示，外源插入片段左邊界和右邊界側(cè)翼序列由來(lái)源于大豆基因組序列和來(lái)源于外源插入片段序列組成，
外源插入片段左邊界側(cè)翼序列包括：
(1)SEQ-2第1-213位點(diǎn)序列來(lái)源于栽培大豆Williams82基因組序列；
(2)SEQ-2第214-895位點(diǎn)序列來(lái)源于外源插入片段序列；
外源插入片段右邊界側(cè)翼序列包括：
(1)SEQ-3第1-615位點(diǎn)序列來(lái)源于外源插入片段序列；
(2)SEQ-3第616-998位點(diǎn)序列來(lái)源于栽培大豆Williams82基因組序列。
2.權(quán)利要求1所述外源插入片段左、右邊界側(cè)翼序列的制備方法，其特征在于，提取轉(zhuǎn)基因大豆事件E2D8037-3基因組DNA，利用基因組重測(cè)序技術(shù)分析確定外源片段插入位點(diǎn)，并通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得。
3.權(quán)利要求1所示序列在建立轉(zhuǎn)基因大豆事件E2D8037-3特異性檢測(cè)方法或制備檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，依據(jù)權(quán)利要求1所示序列，制備特異性引物或探針。
4.權(quán)利要求1所述序列、權(quán)利要求3所述特異性檢測(cè)方法或檢測(cè)試劑盒在轉(zhuǎn)基因大豆事件E2D8037-3檢測(cè)中的應(yīng)用，其中檢測(cè)對(duì)象包括親本、衍生品系或品種，及其制品或產(chǎn)品。
5.權(quán)利要求3或4所述特異性檢測(cè)方法，其特征在于，使用兩條引物組合，其中一條引物為依據(jù)SEQ-2第1-213位點(diǎn)序列設(shè)計(jì)的正向引物，另一條引物為依據(jù)SEQ-2第214-895位點(diǎn)序列設(shè)計(jì)的反向引物，即所述兩條引物組合為權(quán)利要求1所述外源插入片段左邊界側(cè)翼序列特異性檢測(cè)引物。
6.權(quán)利要求3或4所述檢測(cè)試劑盒，其特征在于，使用兩條引物組合，其中一條引物為依據(jù)SEQ-2第1-213位點(diǎn)序列設(shè)計(jì)的正向引物，另一條引物為依據(jù)SEQ-2第214-895位點(diǎn)序列設(shè)計(jì)的反向引物，即所述兩條引物組合為權(quán)利要求1所述外源插入片段左邊界側(cè)翼序列特異性檢測(cè)引物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述外源插入片段左邊界側(cè)翼序列特異性檢測(cè)引物，其特征在于，如SEQ-4和SEQ-5所示：
所述正向引物SEQ-4為：5’-CCACCACTCCCAATGACAACA-3’
所述反向引物SEQ-5為：5’-GCATCTTGAACGATAGCCTTTCCT-3’。
8.權(quán)利要求3或4所述特異性檢測(cè)方法，其特征在于，使用兩條引物組合，其中一條引物為依據(jù)SEQ-3第1-615位點(diǎn)序列設(shè)計(jì)的正向引物，另一條引物為依據(jù)SEQ-3第616-998位點(diǎn)序列設(shè)計(jì)的反向引物，即所述兩條引物組合為權(quán)利要求1所述外源插入片段右邊界側(cè)翼序列特異性檢測(cè)引物。
9.權(quán)利要求3或4所述檢測(cè)試劑盒，其特征在于，使用兩條引物組合，其中一條引物為依據(jù)SEQ-3第1-615位點(diǎn)序列設(shè)計(jì)的正向引物，另一條引物為依據(jù)SEQ-3第616-998位點(diǎn)序列設(shè)計(jì)的反向引物，即所述兩條引物組合為權(quán)利要求1所述外源插入片段右邊界側(cè)翼序列特異性檢測(cè)引物。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述外源插入片段右邊界側(cè)翼序列特異性檢測(cè)引物，其特征在于，如SEQ-6和SEQ-7所示：
所述正向引物SEQ-6為：5’-GGGAGAGGCGGTTTGCGTATT-3’
所述反向引物SEQ-7為：5’-GAGGGATAGTAACTCATGCAATAAACG-3’。
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