[發明專利]高油酸轉基因大豆事件EB8072外源插入片段側翼序列及其應用

有效

• 申請號: 201810138896.8
• 申請日: 2018-02-03
• 公開（公告）號: CN108374007B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 楊向東;楊靜;仲曉芳;牛陸;賀紅利;邢國杰;郭東全;錢雪燕;姚瑤
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種高油酸轉基因大豆事件EB8072外源插入片段側翼序列及其應用，屬于植物生物技術領域。具體地，涉及一種高油酸轉基因大豆事件EB8072外源插入片段左、右邊界側翼序列及其應用。本發明公開的轉基因大豆事件EB8072外源插入片段左邊界側翼序列如SEQ?2所示，右邊界側翼序列如SEQ?3所示。本發明公開的轉基因大豆事件EB8072外源插入片段側翼序列可以用作目標DNA序列，建立該轉基因事件特異性檢測方法。本發明提供的外源插入片段側翼序列及檢測方法適用于對該轉基因大豆事件包括親本、衍生品系或品種，及其制品包括植株、組織、種子及產品的特異性檢測。

技術領域

本發明涉及植物生物技術領域，具體地，涉及一種高油酸轉基因大豆事件EB8072外源插入片段側翼序列及其應用。

背景技術

油酸是一類廣泛存在于多種油料作物(如大豆、油菜、花生等)籽粒中的不飽和脂肪酸。研究表明，油酸具有重要的營養和保健功能。油酸能夠降低人體血液中膽固醇的含量，減少其在血管上的沉積，有軟化血管、預防動脈硬化等作用。營養界一般把油酸稱為“安全脂肪酸”，油酸的含量多少，是評定食用油品質的重要標志。另外，由于脂肪酸不飽和程度較低，高比例的油酸可以有效提高食用油的穩定性。大豆種子油酸的含量一般為20～25％，而不飽和程度較高的亞油酸和亞麻酸比例則高達60％以上。盡管亞油酸被認為是一種重要的脂肪酸，而且對降低血液中膽固醇水平有一定作用，但富含亞油酸的植物油是高度不穩定的，當其暴露在空氣中或烹調時產生的高溫很容易發生過氧化作用，產生一些對健康有害的氧化產物，并伴有難聞的氣味。同時在加工過程中易產生對人體有害的反式脂肪酸。與之相反的是，油酸是一種單價不飽和脂肪酸，其穩定性高，富含油酸的食用油可用于長時間的保存和高溫烹調而不易氧化變質。再加上油酸本身所具有的營養和保健功能，使得油酸含量的多少在很大程度上決定了大豆優油脂的品質。因此，提高大豆油酸含量，培育高油酸大豆品種，對于提升大豆品質具有重要的意義。

在種子發育過程中，質體中的脂肪酸合成酶復合物催化乙酰CoA合成脂肪酸，并進入細胞質中合成三酯酰甘油。作為LA合成的前體，OA是多不飽和脂肪酸合成途徑中最關鍵的步驟。Δ¹²-脂肪酸脫飽和酶(delta-twelve fatty acid desaturase 2enzyme，FAD2，EC1.3.1.35)是催化這一生化過程的關鍵酶，決定種子中多不飽和脂肪酸的含量。已有研究表明，抑制或過表達FAD2-1基因，可以顯著改變油酸/亞油酸比例。Pham等研究發現，FAD2-1A和FAD2-1B雙突變體大豆的油酸含量極顯著提高(80％)。Zhang等通過反義RNA介導轉錄后基因沉默抑制大豆內源FAD2基因的表達，獲得了油酸含量高達51.71％的轉基因大豆。Wang等利用RNAi技術抑制大豆FAD2基因，獲得了油酸含量為71.5％-81.9％的大豆品系。Haun等利用人工核酶技術(Transcription activator-like effector nucleases，TALEN)對大豆內源FAD2-1A和FAD2-1B進行定點突變，獲得了油酸含量達80％的轉基因大豆。吉林省農業科學院采用農桿菌介導法將大豆反義GmFAD2-1B基因片段導入大豆栽培品種Williams82，獲得高油酸轉基因大豆事件EB8072。連續多代脂肪酸組分分析表明，轉基因大豆EB8072油酸含量最高達80.22％，顯著高于受體對照品種Williams82(17.81-22.0％)，提高2.0-2.6倍。另外，轉基因大豆亞油酸含量比對照降低50％左右，飽和脂肪酸-棕櫚酸和硬脂酸降低至10％左右，其脂肪酸組成接近于橄欖油(油酸含量70～80％)。目前高油酸轉基因大豆事件EB8072已進入安全評價階段，隨著國家轉基因生物新品種培育重大專項的推進，該轉化事件及其衍生品種或品系有望進入商業化應用。