[發明專利]栽培茄SmHQT基因核心片段及其RNAi表達載體和應用有效
| 申請號： | 201810136195.0 | 申請日： | 2018-02-09 |
| 公開（公告）號： | CN108165555B | 公開（公告）日： | 2021-08-27 |
| 發明（設計）人： | 張彥杰;黃從輝;黃進勇;趙雪潔;張桂蘭;張亞倩;王文明 | 申請（專利權）人： | 鄭州大學 |
| 主分類號： | C12N15/29 | 分類號： | C12N15/29;C12N15/82;C12N1/21;A01H5/00;A01H6/82;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 450001 河南*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 栽培 smhqt 基因 核心 片段 及其 rnai 表達 載體 應用 | ||
1.栽培茄
2.含有權利要求1所述
3.含有權利要求2所述RNAi表達載體的微生物轉化體，其特征在于，其是以農桿菌為受體而轉化得到的。
4.權利要求2所述的RNAi表達載體，或權利要求3所述的微生物轉化體，用于下述至少一種用途：
1）降低栽培茄果實或成熟葉中綠原酸的合成量；
2）降低栽培茄果肉在有氧環境中的褐化程度和/或褐化速度。
5.權利要求2所述RNAi表達載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
a.以含SEQ ID No.3所示序列的重組質粒為模板，以SEQ ID No.2和SEQ ID No.1為引物進行PCR擴增，將擴增產物用HindIII和XbaI雙酶切，再與經同樣雙酶切的pHBLD載體連接，獲得重組質粒pHBLD-SmHQT；
b.按步驟a的方法進行PCR擴增或者直接使用步驟a所得PCR擴增產物，將擴增產物用KpnI和XhoI雙酶切，再與經同樣雙酶切的重組質粒pHBLD-SmHQT連接，獲得重組質粒pHBLD-SmHQTi；
c.將步驟b所得重組質粒pHBLD-SmHQTi用SacI和SpeI雙酶切，再與經SacI和XbaI雙酶切的pBin19載體連接，得所述RNAi表達載體。
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述含SEQ ID No.3所示序列的重組質粒的制備方法包括：以栽培茄的cDNA為模板，以SEQ ID No.2和SEQ ID No.1為引物進行擴增，將擴增產物與pMD-T19載體連接，得含SEQ ID No.3所示序列的重組質粒。
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