[發明專利]一種構建腎臟可誘導性固有巨噬細胞浸潤小鼠模型的方法

有效

• 申請號: 201810133444.0
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108374023B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 曾銳;廖文慧
• 申請（專利權）人: 武漢麥考津生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N9/22;C12N15/66;A01K67/027
• 代理公司: 武漢謙源知識產權代理事務所(普通合伙) 42251
• 代理人: 尹偉

本發明提供了一種構建腎臟可誘導性固有巨噬細胞浸潤小鼠模型的方法，其包括在誘導的條件下特異性地在小鼠腎小管細胞內表達IL34基因的步驟。通過構建可誘導的腎小管高度表達IL34小鼠，從而成功構建了以固有巨噬細胞為主要浸潤特點的腎臟小鼠模型，可以有效避免非選擇性基因過表達和非選擇性細胞浸潤，減少對腎外重要器官和機體整體狀態的影響，還能有效提高腎臟固有巨噬細胞浸潤的特異性。此外，通過這一模型，結合生物信息學分析，還可以進一步探究腎臟固有巨噬細胞的功能，為尋找更具特異性的固有巨噬細胞生物學標記提供可靠路徑，為靶向腎臟固有巨噬細胞的藥物篩查提供可靠的體內研究模型。

技術領域

本發明涉及小鼠疾病模型領域，尤其涉及一種構建腎臟可誘導性固有巨噬細胞浸潤小鼠模型的方法。

背景技術

巨噬細胞具有高度的異質性，在腎臟靜息期，維持組織穩態、組織修復；在病理狀態下，卻促進腎臟纖維化。既往大多數研究，將巨噬細胞簡單地劃分為M1型(炎癥性巨噬細胞)和M2型(修復性巨噬細胞)，忽視了巨噬細胞的表型、功能、內涵和對環境反應的復雜性，同時忽略了M1/M2的功能交叉現象，導致巨噬細胞在腎臟病中的作用模糊不清。因此，現在越來越多的研究者主張將組織內巨噬細胞按來源分為外周巨噬細胞和固有巨噬細胞(Tissue-resident macrophage)。外周巨噬細胞源于骨髓和外周淋巴組織的髓系細胞，炎癥時由外周進入損傷部位，成為腎臟炎性巨噬細胞，以CD45+CD11b+F4/80+Ly6c+為特征；而腎臟固有巨噬細胞產生于胚胎期，成年后長期定植于腎臟，以CD45+CD11b+F4/80+Ly6c-為特征。然而，過去腎臟固有巨噬細胞的報道不多，對其功能也不甚了解，其主要原因是腎臟固有巨噬細胞的特征不明確。

目前尚缺乏腎臟特異性以固有巨噬細胞為主要浸潤特點的小鼠。已有的針對IL34基因干預小鼠，主要是IL34基因全敲除小鼠，但該小鼠存在以下兩個問題：

1)由于該小鼠不是腎臟特異性IL34敲除，更不是腎臟特異性IL34過表達小鼠，涉及到多器官、多系統的綜合作用，存在各系統之間的相互作用，無法直觀的對腎臟作用進行單因素分析；

2)該小鼠同時涉及到其他免疫器官、免疫細胞以及其他巨噬細胞亞型的綜合作用，無法作為腎臟固有巨噬細胞的研究模型。

發明內容

在研究過程中，我們發現，當在腎小管細胞中組成型強表達IL34時會促使腎臟固有巨噬細胞浸潤腎臟。

基于以上發現，本發明提供了一種構建腎臟可誘導性固有巨噬細胞浸潤小鼠模型的方法，其包括在誘導的條件下特異性地在小鼠腎小管細胞內表達IL34基因的步驟。

在一個優選實施方案中，所述在誘導的條件下特異性地在小鼠腎小管細胞內表達IL34基因的步驟通過使全能細胞中同時具有IL34條件表達框和腎小管組織特異性啟動子驅動的在誘導條件下有活性的Cre重組酶表達框來實現，所述IL34條件表達框從5’到3’依次包括靶基因表達啟動子、兩端帶有方向相同的loxp序列的轉錄阻礙片段和IL34基因編碼框。

在一個優選實施方案中，所述腎小管組織特異性啟動子為Cdh16基因啟動子。

在一個優選實施方案中，所述在誘導條件下有活性的Cre重組酶為他莫昔芬可誘導的Cre重組酶。

在一個優選實施方案中，所述在誘導條件下有活性的Cre重組酶表達框插入于小鼠Cdh16基因第18個外顯子與3’UTR之間。

在一個優選實施方案中，所述靶基因表達啟動子為CAG啟動子。

在一個優選實施方案中，所述IL34條件表達框插入于Rosa26基因位點處。

在一個優選實施方案中，所述方法包括以下步驟：

S1：構建帶有所述IL34條件表達框的LSL-IL34小鼠；