[發明專利]一種黃曲霉毒素定量檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201810132052.2
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108444992B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 謝巖黎;寧夢鴿;班珺;孫淑敏
• 申請（專利權）人: 河南工業大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N33/543
• 代理公司: 北京中知法苑知識產權代理有限公司 11226
• 代理人: 常玉明

1.一種黃曲霉毒素B₁的檢測試劑盒，其特征在于：包括黃曲霉毒素B₁標準品、酶標板、鏈酶親和素、第一生物素標記的黃曲霉毒素B₁核酸適體、第二生物素標記的互補鏈、辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(HRP-SA)、顯色液、終止液。

2.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素B₁的檢測試劑盒，其特征在于：所述酶標板為96孔酶標板，和/或所述顯色液為3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺(TMB)。

3.根據權利要求1或2所述的黃曲霉毒素B₁的檢測試劑盒，其特征在于：其中黃曲霉毒素B₁標準品被配置成黃曲霉毒素B₁標準工作液，所述黃曲霉毒素B₁標準工作液的濃度為0～100ng/ml。

4.根據權利要求1或2所述的黃曲霉毒素B₁的檢測試劑盒，其中所述酶標板 的包被液為0.05～0.2M的碳酸緩沖液，3～6μg/ml的鏈霉親和素包被并用2～4％牛血清蛋白封閉。

5.根據權利要求1或2所述的黃曲霉毒素B₁的檢測試劑盒，其特征在于：第一生物素序列如SEQ ID NO：1所示，且所述第一生物素序列的5′末端經生物素標記，和/或第二生物素序列如SEQ ID NO：2所示，且所述第二生物素序列的5′末端經生物素標記；其中，

所述SEQ ID NO：1序列為：

5′-biotin-GTTGGGCACGTGTTGTCTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3′；

所述SEQ ID NO：2序列為：5′-biotin-TGTGGGCCTAGCG-3′。

6.一種黃曲霉毒素B₁的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

設定酶標儀檢測參數；

選擇合適的酶標板，并將鏈酶親和素包被于所述酶標板上，所述酶標板的孔至少包括樣品孔和對照孔，在所述酶標板的每個孔中加入第一生物素標記的黃曲霉毒素B₁核酸適體，并進行孵育和洗滌；

在所述酶標板的每個孔中加入第二生物素標記的互補鏈，并進行孵育和洗滌；

在所述樣品孔中加入待測樣品，所述對照孔中加入等體積的陰性對照液，并進行孵育和洗滌；

在所述酶標板的每個孔中加入HRP-SA，并進行孵育和洗滌；

在所述酶標板的每個孔中加入顯色液，反應后再加入終止液終止反應；

用酶標儀讀取所述酶標板各孔吸光度值，并記錄數據，計算樣品中黃曲霉毒素B₁的濃度。

7.根據權利要求6所述的黃曲霉毒素B₁的檢測方法，其特征在于，所述吸光度值的測試，采用雙波長檢測，測A_450nm/620nm。

8.根據權利要求6所述的黃曲霉毒素B₁的檢測方法，其特征在于，所述顯色液為3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺(TMB)，和/或所述終止液為H₂SO₄。

9.根據權利要求6所述的黃曲霉毒素B₁的檢測方法，其特征在于，第一生物素序列如SEQID NO：1所示，且所述第一生物素序列的5′末端經生物素標記，和/或第二生物素序列如SEQID NO：2所示，且所述第二生物素序列的5′末端經生物素標記；其中，

所述SEQ ID NO：1序列為：

5′-biotin-GTTGGGCACGTGTTGTCTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3′；

所述SEQ ID NO：2序列為：5′-biotin-TGTGGGCCTAGCG-3′。

10.根據權利要求6所述的黃曲霉毒素B₁的檢測方法，其特征在于，其中所述酶標板的包被液為0.05～0.2M的碳酸緩沖液，3～6μg/ml的鏈霉親和素包被并用2～4％牛血清蛋白封閉。