[發明專利]一種擬南芥高效培育的技術方法

在審

• 申請號: 201810130258.1
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108419657A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 伍林濤;奉斌;韓宏仕;徐春;曾章麗
• 申請（專利權）人: 貴州省油菜研究所
• 主分類號: A01G31/00
• 分類號: A01G31/00;A01G22/00;A01G24/15;A01G24/22;A01G24/27
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 劉楠;李余江

本發明公開了擬南芥高效培育的技術方法，將油菜籽餅粕發酵10天后與培養擬南芥營養土及蛭石混合在高壓滅菌鍋進行高溫高壓消毒滅菌，室溫放置冷卻后播種春化處理的擬南芥種子，待擬南芥生長至現蕾期摘除主花序而抑制頂端優勢，生長至盛花期即可用于擬南芥轉化實驗。由于在擬南芥培養基質營養土和蛭石中加入了發酵后的油菜籽餅粕，擬南芥生長所需營養更加豐富全面，生長更加旺盛，擬南芥植株更加健壯。現蕾期進行主花序的摘取有效的抑制了頂端生長優勢，同時植株本身生長健壯，從而產生的花序較多，有利于進行擬南芥的轉化實驗。操作過程簡單，技術要求程度低，環境因子要求不嚴，放置于一般的光照培養箱即可。

技術領域

本發明涉及生物技術研究領域，特別是一種擬南芥高效培育的技術方法。

技術背景

擬南芥屬于十字花科植物，是最常見的模式植物，廣泛用于遺傳、生理生化及分子生物學研究的各個領域。擬南芥的植株高度較矮，只有30cm左右；基因組簡單，只有5對染色體，雖然基因組簡單，但是具有相對復雜的十字花科植物同源性較高的基因組信息；擬南芥生長周期短，只有6周左右即可收獲下一代擬南芥種子；形態特征簡單，但是具有完整的根、莖、葉、花、果實及種子常見組織器官；全基因組測序已經完成，基于上述原因，擬南芥在研究植物形態解剖、分子遺傳、基因表達調控、生物信息等方面發揮了非常重要的作用。

隨著現代植物分子生物學的研究進展，大量的植物基因組序列信息被獲得，如轉錄調控因子MYB、NAC、NAM、WRKY及重要的功能基因，在獲取序列信息后為進一步闡釋其生物學功能，有必要做遺傳轉化進行分析驗證，而對于基因組復雜、生長周期長、分析驗證相對困難的重要農作物，植物科學家往往首先把克隆獲得的基因序列在模式植物擬南芥中進行分析驗證，因此，擬南芥的遺傳轉化成為基因功能分析及驗證常見的技術手段，擬南芥的培養是其非常關鍵的環節。而當前擬南芥培養過程中植株矮小、對環境因子要求嚴格、花序較少，難以滿足擬南芥遺傳轉化實驗的需求。

基于以上原因，通過反復實驗在科研實踐中逐漸摸索一套技術方案，提供一種以油菜籽餅粕為基礎的培養的技術方法，是有十分重大的意義的。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：主要針對現有技術中擬南芥培養過程中植株矮小、對環境因子要求嚴格、花序較少，難以滿足擬南芥轉化實驗的需求，提供一種以油菜籽餅粕為基礎的培養的技術方法，該方法培養的擬南芥植株生長旺盛、植株高大、花序較多、對環境因子要求不嚴。

為解決擬南芥培養過程中的主要問題，本發明所采用的技術方案為：

油菜籽餅粕發酵10天后與培養擬南芥營養土及蛭石混合在高壓滅菌鍋進行高溫高壓消毒滅菌，室溫放置冷卻后播種春化處理的擬南芥種子，待擬南芥生長至現蕾期摘除主花序而抑制頂端優勢，生長至盛花期即可用于擬南芥轉化實驗。

上述方案實施的步驟為：

1、油菜籽餅粕和水按照4:1混合均勻，在玻璃器皿放置于溫室進行發酵10天。

2、擬南芥種子用0.1％的HgCl2消毒滅菌后清水沖洗，然后用75％的酒精進行滅菌3次，滅菌水清洗后放置于4℃春化處理4天。

3、發酵后的油菜籽餅粕：營養土：蛭石按照1:2:1的比例混合均勻，在高壓滅菌鍋進行高溫高壓滅菌，室溫冷卻后分裝在擬南芥培養花缽。

4、春化處理后的擬南芥種子均勻播種在上述花缽表面，放置在光照培養箱培養至現蕾期，摘取擬南芥頂端的主花序，抑制擬南芥頂端優勢，繼續在光照培養箱培養至盛花期即可用于擬南芥的轉化實驗。

與現有技術相比，本發明所具有的有益效果為：

1、由于在擬南芥培養基質營養土和蛭石中加入了發酵后的油菜籽餅粕，擬南芥生長所需營養更加豐富全面，生長更加旺盛，擬南芥植株更加健壯。