[發明專利]一種從酵母菌發酵液中提取抗菌肽的方法

在審

• 申請號: 201810130224.2
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108251478A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 全盈園
• 申請（專利權）人: 金華市鐵騎士生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C07K1/22;C12R1/865
• 代理公司: 北京華識知識產權代理有限公司 11530
• 代理人: 趙永強

1.一種從酵母菌發酵液中提取抗菌肽的方法，包括發酵、抗菌肽分離，其特征在于：所述抗菌肽分離步驟為：向發酵液中加入殼寡糖，振蕩吸附，離心，上清液濃縮，冷凍干燥即為多肽，所述殼寡糖為殼寡糖磁性粒子。

2.根據權利要求1所述的一種從酵母菌發酵液中提取抗菌肽的方法，其特征在于：所述殼寡糖的添加量為0.1-0.2mg/mL，振蕩吸附溫度為30-40℃、時間為25-35min。

3.根據權利要求1所述的一種從酵母菌發酵液中提取抗菌肽的方法，其特征在于：所述殼寡糖磁性粒子的制備方法為：

步驟1：按料液比為1:12-16（g/L）將殼聚糖加入水中，調節其pH至4.5-5.5，然后按加酶量為5-7%加入復合酶，復合酶中木瓜蛋白酶和纖維素酶的配比為1:0.4-0.6，在溫度為40-50℃的條件下酶解4-6h，酶解過程中輔以過氧化氫降解，隨后調節酶解液的pH值至中性，沉淀未降解的殼聚糖，上清液濃縮，真空干燥得到水溶性的殼寡糖；

步驟2：將0.4-0.6重量份殼寡糖溶于18-22重量份去離子水中，再加入0.2-0.3重量份Fe3O4磁粒子，在超聲波功率為、的條件下超聲處理1-2min，然后在攪拌下緩慢加入70-90重量份液體石蠟和3-5重量份吐溫80，在700-1000rpm條件下攪拌20-40min，再加入4-6重量份戊二醛，繼續攪拌2-3h，再置于50-70℃下保溫1.5-2.5h，產物用石油醚、丙酮、去離子水反復洗滌，最后在35-45℃真空干燥，即得殼寡糖磁性粒子。

4.根據權利要求3所述的一種從酵母菌發酵液中提取抗菌肽的方法，其特征在于：所述過氧化氫溶液加入時間為酶解結束前50-70min，過氧化氫溶液的濃度為8-12%，H2O2和酶液的體積比為1:6-10。

5.根據權利要求4所述的一種從酵母菌發酵液中提取抗菌肽的方法，其特征在于：所述過氧化氫溶液中含有0.2-0.3mM的兒茶酚和0.01-0.1mM鞣花酸。

6.根據權利要求1所述的一種從酵母菌發酵液中提取抗菌肽的方法，其特征在于：所述發酵步驟為：按料液比為1:15-25（g/mL）將植物脫脂蛋白粉溶于水中，在115-125℃下滅菌20-30min，冷卻至室溫，然后按接種量為8-12%接種啤酒酵母，再加入啤酒酵母重量0.02-0.5%的阿拉伯糖，然后在25-35℃的條件下培養30-40h得酵母菌發酵液，備用。

7.根據權利要求6所述的一種從酵母菌發酵液中提取抗菌肽的方法，其特征在于：所述阿拉伯糖含有0.1-1.5%的D-阿拉伯糖。