[發(fā)明專利]一種鞣花酸試劑及其配制方法與活化部分凝血活酶時(shí)間測定試劑、APTT試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810129827.0
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108226540B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李幼鵬;王宇
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢市長立生物技術(shù)有限責(zé)任公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 北京細(xì)軟智谷知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11471
• 代理人: 張肖

一種鞣花酸試劑及其配制方法與活化部分凝血活酶時(shí)間測定試劑、APTT試劑盒，涉及臨床診斷試劑領(lǐng)域。配制方法是將鞣花酸加入無鈣純化水中，快速攪拌，使其均勻分散；加入堿性緩沖液或無機(jī)堿；在加入鞣花酸后10分鐘內(nèi)快速加入酸性緩沖液或有機(jī)酸、無機(jī)酸；加入金屬離子；加入氨基酸及其衍生物，得緩沖液；另外在兔腦磷脂中加入無鈣純化水，混勻乳化得乳化磷脂；將乳化磷脂加入緩沖液中，快速攪拌混勻，得到鞣花酸試劑，該工藝簡單快捷，且均有詳細(xì)說明?；罨糠帜蠲笗r(shí)間測定試劑包括上述的鞣花酸試劑和氯化鈣試劑，具有良好的穩(wěn)定性。包括上述活化部分凝血活酶時(shí)間測定試劑的APTT試劑盒能直接取代進(jìn)口高穩(wěn)定性APTT試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及臨床診斷試劑領(lǐng)域，且特別涉及一種鞣花酸試劑及其配制方法與活化部分凝血活酶時(shí)間測定試劑、APTT試劑盒。

背景技術(shù)

在臨床檢查的領(lǐng)域中，已知通過測定血液的凝固時(shí)間來研究血液凝固因子的異常等檢查，其中，APTT測定作為一般的血液凝固能力的臨床檢查之一。APTT(activatedpartial thromboplastin time)即活化部分凝血活酶時(shí)間，是指反映出血時(shí)血液通過與有陰性電荷的異物接觸而開始的內(nèi)因性凝固途徑的功能的凝固時(shí)間。APTT測定不僅是在內(nèi)因性凝固因子的缺乏或異常的篩選檢查中利用，還在肝素療法的監(jiān)測等中利用。

現(xiàn)有APTT試劑大多采用兔腦磷脂，該磷脂在空氣中易變?yōu)榧t棕色，有吸濕性，不溶于水和丙酮，微溶于乙醇，溶于氯仿和乙醚，因此存在溶解問題，若強(qiáng)行攪拌溶解會產(chǎn)生不均勻的不溶物，從而導(dǎo)致工藝不可控，若加熱溶解則可能使磷脂失活甚至氧化。通過檢索，部分現(xiàn)有專利并未詳細(xì)說明磷脂處理過程，另外一些現(xiàn)有專利公開的磷脂處理均存在一些問題，例如：申請?zhí)朇N200710036410.1的發(fā)明專利中的兔腦提取腦磷脂用蒸餾水溶解，這很難實(shí)現(xiàn)，因此該專利存在工藝誤導(dǎo)；申請?zhí)朇N200810083554.7的發(fā)明專利公開的液體白陶土APTT試劑雖表明其37℃下可穩(wěn)定至少30天，但并未披露其具體工藝，再加之激活劑的不同，試劑的敏感性亦不同，該APTT試劑的性能未可知。

出于臨床靈敏度、疾病鑒別或品質(zhì)升高的目的，近年，將多種合成磷脂混合使用(參照例如，US2011/159597)。另外，作為合成磷脂的種類，將磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰膽堿(PC)及磷脂酰絲氨酸(PS)的3種混合而含在試劑中成為主流，但合成磷脂種類較多，不易獲取且價(jià)格昂貴，另外各組分比例亦較難把控，同樣存在溶解問題，部分會導(dǎo)致沉淀生成，影響試劑品質(zhì)?，F(xiàn)有試劑會存在鞣花酸及磷脂沉淀問題，鞣花酸緩沖液，原料處理如鞣花酸在堿性條件下會失去活性，磷脂乳化是否均勻，鞣花酸緩沖液與磷脂的配比問題等都直接影響了國產(chǎn)試劑的品質(zhì)，導(dǎo)致市場仍被以西門子、思塔高、沃芬等巨頭占有。

因此，一種制作工藝簡單，穩(wěn)定性高，能直接取代進(jìn)口高穩(wěn)定性活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)試劑盒被市場所期待。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種鞣花酸試劑及其配制方法，包括磷脂乳化，鞣花酸溶解，各原料添加順序、APTT時(shí)間調(diào)節(jié)等的生產(chǎn)工藝，該工藝簡單快捷，且均有詳細(xì)說明。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種活化部分凝血活酶時(shí)間測定試劑，該試劑具有良好的穩(wěn)定性，37℃下可穩(wěn)定至少30天，試劑開蓋后于5±3℃下至少穩(wěn)定30天以上。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種APTT試劑盒，能直接取代進(jìn)口高穩(wěn)定性活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)試劑盒。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。

本發(fā)明提出一種鞣花酸試劑的配制方法，其包括以下步驟：

將鞣花酸加入無鈣純化水中，快速攪拌，使其均勻分散；首先加入堿性緩沖液或無機(jī)堿；然后在加入鞣花酸后10分鐘內(nèi)快速加入酸性緩沖液或有機(jī)酸、無機(jī)酸，調(diào)pH至7.1±0.1；之后加入金屬離子；接著加入氨基酸及其衍生物，得緩沖液；