[發明專利]一種檢測人KRAS基因突變的試劑盒

在審

• 申請號: 201810129693.2
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108060215A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: 張亮;鐘建;方平科
• 申請（專利權）人: 天津安必森生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測人KRAS基因突變的試劑盒，其特征在于：包括1管總體檢測K-ras基因突變的反應混合液和7管單獨檢測K-ras突變的反應混合液；

1管所述總體檢測K-ras基因突變的反應混合液包括K-ras基因特異性分子開關引物、下游引物、K-ras基因特異性探針、競爭性抑制寡核苷酸序列、熱穩定性DNA聚合酶、反應緩沖液和反應增強劑；

7管所述單獨檢測K-ras突變的反應混合液包括Gly12Asp、Gly12Val、Gly12Ser、Gly12Cys、Gly12Ala、Gly12Arg和Gly13Asp。

2.根據權利要求1所述的一種檢測人KRAS基因突變的試劑盒，其特征在于：每管所述單獨檢測K-ras突變的反應混合液中均包括K-ras基因特異性ARMS引物、K-ras基因特異性探針、競爭性抑制寡核苷酸序列、熱穩定性DNA聚合酶、反應緩沖液和反應增強劑。

3.根據權利要求1所述的一種檢測人KRAS基因突變的試劑盒，其特征在于：所述K-ras基因特異性分子開關引物為三條引物的等摩爾混合物，三條引物的序列分別為：

(1)用于檢測12號密碼子首位堿基突變的分子開關引物：

AAATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTG*；

(2)用于檢測12號密碼子第二位堿基突變的分子開關引物：

AAATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTGG*；

(3)用于檢測13號密碼子第二位堿基突變的分子開關引物：

CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTGGTGG*；

其中，上述分子開關引物序列中*號標志代表雙脫氧核苷酸(ddNTP)。

4.根據權利要求1所述的一種檢測人KRAS基因突變的試劑盒，其特征在于：所述總體檢測K-ras基因突變的反應混合液中用于檢測檢測所有K-ras突變位點的下游引物序列為：ACCTCTATTGTTGGATCATATTCGTCCACA。

5.根據權利要求1所述的一種檢測人KRAS基因突變的試劑盒，其特征在于：所述總體檢測K-ras基因突變的反應混合液中的熱穩定性DNA聚合酶為體積比為9:1的Taq DNA聚合酶和Phusion DNA聚合酶的混合物。

6.根據權利要求2所述的一種檢測人KRAS基因突變的試劑盒，其特征在于：每管所述單獨檢測K-ras突變的反應混合液中K-ras基因特異性ARMS引物為相應的K-ras基因突變型的上游引物，引物序列分別為：

(1)用于檢測Gly12Asp突變位點的上游引物序列：

AAATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGATCCGA；

(2)用于檢測Gly12Val突變位點的上游引物序列：

AAATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGATCCGT；

(3)用于檢測Gly12Ser突變位點的上游引物序列：

AAATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGCGTTA；

(4)用于檢測Gly12Cys突變位點的上游引物序列：

AAATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGCGTTT；

(5)用于檢測Gly12Ala突變位點的上游引物序列：

AAATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGATCCGC；

(6)用于檢測Gly12Arg突變位點的上游引物序列：

AAATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGCGTTC；

(7)用于檢測Gly13Asp突變位點的上游引物序列：

CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTTGCGA

其中，K-ras基因特異性ARMS引物的3’端第3位和第5位核苷酸分別引入脫氧核苷酸突變。