[發(fā)明專利]大豆活性肽的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810128848.0
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108220374A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設計）人: 周艷初
• 申請（專利權）人: 金華市艾力生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
• 代理公司: 北京華識知識產權代理有限公司 11530
• 代理人: 趙永強

本發(fā)明公開了大豆活性肽的制備方法，其具體步驟為：向大豆分離蛋白中加入蒸餾水，熱處理，冷卻至室溫，調節(jié)其pH，依次加入堿性蛋白酶和風味蛋白酶進行酶解，滅酶，離心上清液即為酶解液；將酶解液中加入β?環(huán)糊精進行脫腥，濾掉β?環(huán)糊精；將脫腥酶解液用超濾膜進行超濾，濾液凍干；用雙蒸水平衡層析柱，將經過超濾處理的冷凍樣品用雙蒸水溶解，取離心上清液進行凝膠層析，上樣后用雙蒸水洗脫，檢測收集液在214nm處的吸光值A214，收集抗氧化活性較高的組分，冷凍干燥即得大豆活性肽。有益效果為：本發(fā)明活性肽的制備方法簡單可行，提取效率、得率和純度高，制得的活性肽的抗氧化活性高、無腥苦味。

技術領域

本發(fā)明涉及生物提取技術領域，特別涉及大豆活性肽的制備方法。

背景技術

大豆分離蛋白（SoyProteinIsolate，簡稱為SPI）以低溫脫脂豆粕為原料，采用堿溶酸沉工藝除去脫脂豆粕中的非蛋白質組分，從而得到蛋白質含量在90%以上粉末狀大豆制品。SPI含有20余種氨基酸，并含有大量多種人體所需要的必需氨基酸，是在理論上可完全替代動物蛋白的植物蛋白，但是，一方面由于SPI提取過程中的堿提酸沉，使得SPI中的蛋白質變性造成SPI溶解度較低、分散性較差，特別是在SPI的等電點區(qū)域pH4~5內的低溶解度限制了SPI在酸性飲料中的應用，且SPI的低溶解性制約了SPI的乳化性、凝膠性、發(fā)泡性、保水性等功能理化性質，同時對食品工業(yè)中添加SPI食品的穩(wěn)定性、風味有直接的影響，因此提高SPI的溶解性對現(xiàn)代食品的研究開發(fā)與產品的深加工有著重要意義；另一方面，機體對SPI的消化與吸收利用率不如牛奶、雞蛋等動物蛋白含量高的食品，限制了SPI在食品工業(yè)中的添加和使用范圍。SPI的改性方法包括物理改性、化學改性以及酶法改性，其中酶法改性條件溫和簡單、操作簡單、改性后副產物少、產率高、安全性好，得到的產物為大豆多肽和一些游離氨基酸，不僅是人體極易吸收消化的蛋白，而且更適合食品加工領域中的應用。大豆多肽作為生物活性肽的一種，具有生物活性肽的抗氧化、抗疲勞、抗菌、促進能量代謝等生理活性，同時也有疏水性多肽的苦味。酶法改性使得掩藏在蛋白質內部的疏水性氨基酸側鏈釋放，從而與味覺細胞產生苦味。大豆多肽的苦味直接影響了食品的風味，在一定程度上阻礙了大豆多肽在食品中的應用，因此，降低、掩蓋及祛除大豆多肽苦味受到了廣泛的關注，現(xiàn)階段對大豆肽苦味的研究依舊是令人矚目的學科領域。

現(xiàn)有技術如授權公告號為CN 103146788 B的中國發(fā)明專利，公開了一種大豆肽的酶法制備方法，通過創(chuàng)造性的采用蚯蚓絲氨酸蛋白酶作為酶原來酶解大豆分離蛋白，水解效率高，并在制備工藝中采用了超濾技術，使得到的酶解產物大豆肽分離的更加徹底，收率高，整個工藝過程條件溫和，對環(huán)境友好。但是該制備方法得到的大豆肽有苦味，大大限制了其應用。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種制備方法簡單可行，提取效率、得率和純度高，制得的活性肽的抗氧化活性高、無腥苦味的大豆活性肽的制備方法。

本發(fā)明針對上述技術中提到的問題，采取的技術方案為：

大豆活性肽的制備方法，包括預處理、酶解、脫腥、超濾、分離純化，其具體步驟為：

預處理：按料液比為1:15-25（g/mL）向大豆分離蛋白中加入蒸餾水，混合均勻，然后在95-110℃下熱處理5-10min，冷卻至室溫，即得大豆分離蛋白混合液，備用，上述蒸餾水中含有0.02-0.03mM牛磺酸和0.01-0.03mM氨基脲，牛磺酸和氨基脲能夠協(xié)助加熱破壞維持蛋白質高級結構的次級鍵和二硫鍵，可使球蛋白分子的致密結構展開，同時能解離蛋白的亞基，增加酶和酶切位點的接近機會，提高酶的活性，進而提高活性肽的得率，此外，牛磺酸和氨基脲的存在能夠提高蛋白中β-折疊結構提高蛋白對酶的敏感性，最終可使酶解產物水解度大大提高，該步驟通過預處理改變蛋白質的空間結構，蛋白結構變得稀疏，柔化蛋白質剛性結構，使部分弱鍵斷裂，內部非極性基團暴露到分子表面，增大了酶的接觸位點，有助酶發(fā)揮作用，提高酶水解蛋白質的效率，同時還能去除與目標產物無關的物質，如油脂、小分子水溶性物質、微量元素等，進而提高酶解液的純度；