[發明專利]一種脫細胞異體真皮基質及在口腔疾病中的應用

有效

• 申請號: 201810128740.1
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108144124B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 孫繼煌;石清東
• 申請（專利權）人: 北京桀亞萊福生物技術有限責任公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50;A61L27/54
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種脫細胞異體真皮基質的制備方法，其特征在于，所述制備方法由如下步驟組成：

步驟一，將異體皮原料投入酶溶液中，浸泡振蕩處理，得半成品A；所述酶為磷脂酶和蛋白酶；其中，所述磷脂酶為磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D按照質量比為1:1:1:1的混合物；所述蛋白酶為胰蛋白酶；

所述酶溶液pH值為7.0-8.0；

所述磷脂酶濃度為0.1g/L-0.4g/L；

所述蛋白酶的濃度為0.1g/L-0.3g/L；

步驟二，將半成品A取出，用生理鹽水浸泡，振蕩處理，得半成品B；

步驟三，將半成品B投入表面活性劑溶液中，超聲浸泡處理，得半成品C；所述表面活性劑溶液中含有0.1-0.3g/L的SDS，或所述表面活性劑溶液中含有0.1-0.3g/L的Triton X-100；

步驟三所述超聲浸泡的條件為：40-80KHz，100-400W，溫度為1-20℃，超聲3-8分鐘，浸泡2-4小時，重復2-4次；

步驟四，將半成品C用生理鹽水浸泡，振蕩處理，得半成品D；

步驟五，將半成品D投入盛有DNA水解酶溶液的容器中，振蕩處理，得半成品E；

步驟五中所述DNA水解酶溶液的濃度為4-8g/L，pH 7.0-8.0；和/或，所述步驟五中振蕩處理條件為振蕩2-8小時，振蕩轉速為10-200rpm，溫度為10-40℃；

步驟六，將半成品E用生理鹽水浸泡，振蕩處理，得半成品F；

步驟七，將半成品F用注射用水清洗浸泡，得成品G；或者，進一步地，還包括以下步驟：

步驟八，將成品G取出，包裝，滅菌，得成品H；或者將成品G取出，置于含有凍干保護劑的溶液中進行冷凍干燥；包裝，滅菌，得成品H。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟一振蕩處理條件為振蕩0.5-4小時，振蕩轉速為10-200rpm，溫度為10-40℃。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟五中所述DNA水解酶溶液的濃度為4-6g/L。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟二、步驟四、步驟六、振蕩處理條件為振蕩1-2小時，振蕩轉速為80-150rpm，更換生理鹽水，繼續振蕩處理，重復該操作4-6次，溫度為1-5℃；和/或，

所述步驟七注射用水清洗浸泡條件為振蕩2小時，振蕩轉速為80-150rpm，溫度為1-5℃，更換注射用水，繼續振蕩處理，重復該操作4-6次。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟八所述凍干保護劑溶液由磷酸鹽緩沖液、透明質酸和糖組成，其中透明質酸的濃度為0.4-0.8mg/100mL，糖的濃度為10-20mg/100mL，所述糖為海藻糖、乳糖、蔗糖、甘露糖、葡萄糖中的一種或幾種。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟八所述磷酸鹽緩沖液濃度為10mmol/L、pH為7.0。

7.根據權利要求1-6任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟八所述冷凍干燥包括：將成品G于5℃進箱，保持1小時，降溫到-40℃并保持1小時，升溫到-18℃并保持1小時，再次降溫至-35℃保持1小時，啟動真空泵，將干燥箱真空度抽到5-10Pa；用2小時將隔板升溫到-30℃，干燥箱真空度抽到1-5Pa，維持15h；用1小時將隔板升溫到0℃，并維持10h后，測定壓力升，直至壓力升小于1pa；用1小時將隔板升溫到10℃，并維持10h，測定壓力升，直至壓力升小于1pa；用0.5小時將隔板升溫到25℃，并維持8h，測定壓力升，直至壓力升小于1pa；整個干燥過程中前箱真空度不應高于30Pa。

8.權利要求1-7任一項所述方法制備的脫細胞異體真皮基質。

9.根據權利要求8所述的脫細胞異體真皮基質，其特征在于，所述脫細胞異體真皮基質的縫合強度為16N-18N。