[發明專利]一種用于心衰標志物檢測的蛋白芯片及其制備方法

在審

• 申請號: 201810128092.X
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108414769A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 泮鋒綱;施啟堯;丁俊杰;成舜
• 申請（專利權）人: 江蘇三聯生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 無錫華源專利商標事務所(普通合伙) 32228
• 代理人: 聶啟新

本發明公開了一種用于心衰標志物檢測的蛋白芯片，所述蛋白芯片的制備方法包括如下步驟：(1)黑玻片預處理；(2)抗體溶液點樣；(3)封閉工藝；制得所述蛋白芯片。本發明蛋白芯片用于檢測心衰標志物，應用本公司獨創的蛋白芯片技術實現聯合檢測可以有效地提高檢測效率，降低檢測成本；本發明人開發了同時包含有ST2和NT?proBNP兩個指標的蛋白芯片診斷試劑盒，具有快速，高效，低成本等優點。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種用于檢測心衰標志物的蛋白芯片及其制備方法。

背景技術

心血管疾病的死亡率高于包括癌癥、艾滋病在內的其他疾病，是人類健康的“第一殺手”。傳統的診斷技術，如心電圖、心血管彩超、核磁共振、心衰酶譜等在心血管疾病的診斷中扮演著重要的角色，至今被防范采用并不斷完善。隨著科技不斷發展，血液中的心衰標志物檢測被逐步應用于臨床，給心血管疾病的早期診斷、預后轉歸提供了方法。

兩個重要的心衰標志物：ST2和NT-proBNP。ST2(學名可溶性生長刺激表達基因2蛋白)是心臟疾病或損傷反應表達的可溶性蛋白，它反映心臟衰竭相關的心室重構和心臟纖維化。ST2不會受到如年齡、體重指數和腎功能受損這些干擾因素的影響。不像許多其他心臟標志物，ST2水平應對患者病情的變化迅速改變，從而幫助醫生采取適當的決定做出行動，如果需要，迅速調整患者照料措施。NT-proBNP(學名N-端腦利鈉肽前體)被美國FDA批準用于心力衰竭的診斷與評估，以及急性冠脈綜合癥患者的風險評估；也有證據表明，NT-proBNP在評估心血管事件的風險增加和ACS患者的死亡率方面具有預后價值。

目前這兩個標志物已經被醫院廣泛接受。也有多種單獨檢測這兩個指標的試劑盒面市。但是目前采取的主流方法是免疫單指標的測定方法(例如ELISA和化學發光法等)。雖然能夠測定這兩個標志物，但是存在檢測速度慢，檢測成本高等缺點。而且兩個指標分別檢測存在著操作不便，出錯概率大等現實問題。心衰病人一般都是緊急病人，為了加快檢測的速度，不少醫院不得不同時采多管血樣，分別用于檢測ST2和NT-proBNP，造成了較大的浪費和病人負擔。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本發明申請人提供了一種用于心衰標志物檢測的蛋白芯片及其制備方法。本發明蛋白芯片用于檢測心衰標志物，應用本公司獨創的蛋白芯片技術實現聯合檢測可以有效地提高檢測效率，降低檢測成本；本發明人開發了同時包含有ST2和NT-proBNP兩個指標的蛋白芯片診斷試劑盒，具有快速，高效，低成本等優點。

本發明的技術方案如下：

一種用于心衰標志物檢測的蛋白芯片，所述蛋白芯片的制備方法包括如下步驟：

(1)黑玻片預處理；

(2)抗體溶液點樣；

(3)封閉工藝，制得所述蛋白芯片。

步驟(1)中所述黑玻片預處理的方法為：

①將黑玻片置于含有NaOH的玻片預處理液中浸泡16～24h，之后采用純化水清洗2～8次；

②將黑玻片置于質量濃度為0.05～1％的硅烷水溶液中浸泡20～60min；

③將浸泡好的黑玻片放入烘箱中，于100～180℃條件下烘烤0.2～0.6h。

步驟(2)中所述抗體溶液包括ST2單克隆抗體溶液、NT-proBNP單克隆抗體溶液。

步驟(2)中所述點樣的方法為機器自動化點樣。

步驟(3)中所述封閉過程為：將點樣好的黑玻片沒入封閉液中1～24h，之后取出黑玻片，并離心去除殘余封閉液，制得所述蛋白芯片。