[發明專利]一種改良的小鼠胰島細胞富集方法

有效

• 申請號: 201810127907.2
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108130307B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 馬毅;章旭之;李仲秋;鄧榮海;吳旭坤;饒佳偉;周曉轉
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第一醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

本發明公開了一種改良的小鼠胰島細胞富集方法。首先將已分離提取的胰島培養6～48小時后，離心棄上清后用培養液重懸，過濾重懸液，濾渣即為富集的胰島細胞；再將富集的胰島組織注射入“U”形管，利用連通器原理使胰島組織聚集于“U”形管。利用該方法富集小鼠胰島，可顯著提高操作成功率和產率，并保持胰島細胞活性，還可有效節約時間；該方法是一種更加簡單快捷、廉價高效的小鼠胰島細胞富集方法，在小鼠胰島移植模型構建、新藥實驗、內分泌學基礎研究等領域具有實際的應用價值，具有很好的推廣應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域。更具體地，涉及一種改良的小鼠胰島細胞富集方法。

背景技術

目前器官移植是治療各類終末期疾病的最佳手段之一，但移植術后的排斥反應仍是影響患者術后長期生存的最重要原因，針對該領域的仍需開展大量研究。在移植免疫的研究中，合適的動物模型是必不可少的；目前常用的用于移植免疫研究的動物模型包括皮膚移植、心臟移植、胰島移植等，其中小鼠胰島移植因其操作相對簡單、價格低廉、觀察指標確切等優點，而成為目前最廣泛應用的移植免疫模型。

小鼠胰島移植方法包括原位移植和異位移植，其中以異位移植多見。異位移植又包括皮下、血液、肝臟和腎包膜下，其中以后兩者為多。目前小鼠胰島移植的手術操作已基本成熟，移植手術本身成功率已有保證。但是，傳統的小鼠胰島移植技術中仍存在一些亟待解決的問題，包括：1.胰島分離難度較大，穿刺失敗率高，得率較低；2.胰島提純操作繁瑣，提取純度低；3，胰島分散且不均一，富集困難；4.胰島活力及功能不一致，移植操作難以保證實驗操作的一致性，易出現統計學誤差等。其中問題1.及問題2.已有一些解決方案報道（如專利201510886141.2），但其他問題，尤其是小鼠胰島富集這一關鍵問題的解決方案則尚未見報道。在小鼠胰島富集領域存在的問題極大的制約了小鼠胰島移植技術的推廣及應用，亟待解決。

同時，近年來除了移植免疫研究領域，在新藥實驗、內分泌學基礎研究等領域中富集的小鼠胰島細胞亦成為研究所需的必須品。對小鼠胰島細胞的富集方法的改良研究亦可對這些領域產生重要的意義。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有小鼠胰島細胞富集方法的缺陷和不足，提供一種可有效節約時間、提高操作成功率和產率，并保持胰島細胞活性的小鼠胰島細胞改良富集方法。

本發明的目的是提供一種改良的小鼠胰島細胞富集方法。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

一種改良的小鼠胰島細胞富集方法，首先將已分離提取的胰島培養6～48小時后，離心棄上清后用培養液重懸，過濾重懸液，濾渣即為富集的胰島細胞；再將富集的胰島組織注射入“U”形管，利用連通器原理使胰島組織聚集于“U”形管。

優選地，所述改良的小鼠胰島細胞富集方法包括如下步驟：

（1）胰島細胞的富集：將已分離提取的胰島使用含10～20%胎牛血清的RMPI1640在36℃～38℃培養6～48小時，離心棄上清，沉淀用RMPI1640重懸，以0.05～0.2mm網孔的過濾件過濾重懸液，濾渣即為富集的胰島細胞；

（2）富集胰島細胞的收集：用微量移液工具收集步驟（1）富集的包膜完整的胰島組織，沿“U”形管一端以5～15μl/s的速度緩慢注射入“U”形管，利用連通器原理使胰島組織聚集于“U”形管。

其中，優選地，步驟（1）中，還需將濾渣轉移至裝有RMPI1640的培養容器中，此時肉眼可見白色點狀物聚集于培養容器，將培養容器沿順時針方向、以20～100cm半徑、5～30圈/每分鐘的速度水平旋轉培養容器使白色點狀物富集，即得到富集的胰島細胞。

優選地，步驟（1）中，已分離提取的胰島使用含15%胎牛血清的RMPI1640在37℃培養24小時。

優選地，步驟（1）中離心的條件是600～1200rpm、4～25℃離心1～2min。