[發明專利]基于pOp/LhG二元表達系統的外源基因清除技術基礎載體及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 201810125980.6 | 申請日： | 2018-02-08 |
| 公開（公告）號： | CN108300734A | 公開（公告）日： | 2018-07-20 |
| 發明（設計）人： | 趙德剛;丁靜;蓋鈞鎰;李義;翟新秘;吳寒 | 申請（專利權）人： | 貴州大學;南京農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;A01H1/02;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責任公司 32218 | 代理人： | 徐冬濤 |
| 地址： | 550025 *** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 外源基因 激活 標記基因表達框 制備方法和應用 重組酶識別序列 表達系統 技術基礎 表達框 無性繁殖 生物安全性 研究和應用 基礎載體 親本雜交 載體形式 性繁殖 重組酶 親本 異交 應用 繁殖 改進 | ||
1.一種基于pOp/LhG二元表達系統的外源基因清除技術基礎載體，其特征在于，所述外源基因清除技術基礎載體包含效應載體和激活載體；
所述效應載體包括重組酶表達框、標記基因表達框1、重組酶識別序列；
所述重組酶表達框包括pOp/LhG二元表達系統中的人工啟動子pOp、重組酶FLP基因和NOS終止子，重組酶表達框序列如SEQ ID NO.1所示；
所述標記基因表達框1包括Ubi啟動子、Bar-GUS融合基因、35S終止子，標記基因表達框1序列如SEQ ID NO.2所示；
所述重組酶識別序列包括LB loxP-FRT(SEQ ID NO.3)和RB loxP-FRT(SEQ ID NO.4)；
所述激活載體包括激活表達框、標記基因表達框2、重組酶識別序列；
所述激活表達框包括pOp/LhG二元表達系統中的轉錄激活子LhG4基因、NOS終止子，激活表達框序列如SEQ ID NO.6所示；
所述標記基因表達框2包括35S啟動子、GUS-NPTII融合基因、35S終止子，標記基因表達框2序列如SEQ ID NO.7所示；
所述重組酶識別序列與效應載體的相同，包括LB loxP-FRT(SEQ ID NO.3)和RB loxP-FRT(SEQ ID NO.4)；
所述效應載體和激活載體分別整合在不同的載體pCAMBIA0380上，載體pCAMBIA0380序列如SEQ ID NO.5所示。
2.根據權利要求1所述的基于pOp/LhG二元表達系統的外源基因清除技術基礎載體，其特征在于，所述重組酶識別序列LB loxP-FRT整合在載體pCAMBIA0380的T-DNA插入區域的左邊界內側；
所述重組酶識別序列RB loxP-FRT整合在載體pCAMBIA0380的T-DNA插入區域的右邊界內側；
所述重組酶表達框和標記基因表達框1順序整合在效應載體的重組酶識別序列LBloxP-FRT和RB loxP-FRT之間；
所述激活表達框和標記基因表達框2順序整合在激活載體的重組酶識別序列LB loxP-FRT和RB loxP-FRT之間。
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