[發明專利]FLT3嵌合抗原受體及其應用

有效

• 申請號: 201810124281.X
• 申請日: 2018-02-07
• 公開（公告）號: CN108251442B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 王建祥;王敏;王穎;徐穎茜;饒青
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院血液病醫院（中國醫學科學院血液學研究所）
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;A61K35/17;A61P35/02
• 代理公司: 北京東巖躍揚知識產權代理事務所(普通合伙) 11559
• 代理人: 谷岳

本發明公開了一種編碼嵌合抗原受體的核酸分子，所述嵌合抗原受體包含胞外區、跨膜區和胞內信號轉導區，其編碼的所述胞外區包含FLT3結合結構域，所述FLT3結合結構域為FLT3配體或與所述FLT3配體具有90?99％同一性的氨基酸序列。通過流式細胞術、脫顆粒分析實驗、以及ELISA檢測T細胞分泌的細胞因子，證明該嵌合抗原受體修飾的T細胞對表達FLT3的白血病細胞有很強的殺傷作用，尤其是對攜帶有FLT3突變型的AML細胞具有特異殺傷作用，有效防止了脫靶效應。本發明嵌合抗原受體FLT3L?CD8α?4?1BB?CD3ζ可用于FLT3⁺白血病，尤其是攜帶有FLT3突變的白血病的治療。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，特別涉及FLT3嵌合抗原受體及其應用。

背景技術

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一類造血系統的惡性克隆性疾病，60歲以下患者的長期生存率不到40％，60歲以上患者的治愈率不到15％。FMS樣酪氨酸激酶3(Fms-like tyrosine kinase 3,FLT3)是近年來發現的早期造血生長因子受體基因，在正常造血干/祖細胞(Haemopoietic Stem/progenitor Cells,HSPCs)中低表達。目前研究表明，超過90％的AML患者細胞表達FLT3，而且有約30％的AML患者存在FLT3突變。已知與AML發病相關的FLT3突變主要為內部串聯重復(Internal tandem duplications,ITD)突變和酪氨酸激酶結構域(Tyrosine kinase domain,TKD)突變，其中FLT3-ITD突變可見于約24％的成年AML患者中，約7％的AML患者可發生FLT3-TKD突變。FLT3-ITD或TKD突變通常會引發下游信號通路Raf/MEK/ERK、JAK/STAT5或PI3K/Akt的激活，促進腫瘤的發生發展。核型正常的AML患者出現FLT3突變，提示其預后不良。盡管FLT3抑制劑可改善患者預后，但攜帶有FLT3突變的AML患者的有效治療方案仍然是異基因造血干細胞移植。

腫瘤過繼細胞免疫治療近年來已逐步走向臨床，國內外針對急性淋巴細胞白血病以CD19作為靶抗原的嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor,CAR)修飾的T細胞免疫治療已獲得突破性進展。已報道有超過350例的B-ALL患者參與臨床試驗。在不同診療中心，不同國家，使用不同結構CAR修飾的T細胞(CAR-T)、淋巴細胞清除方案、自體或異體T細胞以及不同的CAR-T回輸數量治療難治復發的B-ALL患者，有50％～90％的患者可達到完全緩解。目前已報道多種針對AML抗原的CAR-T細胞，如CD33、CD123、CD44v6、葉酸受體β(folatereceptor,FRβ)和Lewis-Y CAR-T等，但臨床試驗結果欠佳，尚未見CAR-T治療AML最佳方案的報道。FLT3作為AML發生發展過程中的關鍵基因，具備良好的發展前途。

CAR是一種人工合成的跨膜蛋白，主要由胞外區、跨膜區和胞內信號轉導區構成。胞外區包括信號肽、抗原識別區以及鉸鏈區。常用于CAR結構的信號肽有CD8α和GM-CSF信號肽，可引導抗原識別區及鉸鏈區轉移到胞外。抗原識別區具有特異性識別并結合腫瘤細胞表面抗原的功能，通常由抗體的輕鏈和重鏈通過柔性連接肽(flexible linker)連接而成的單鏈抗體(single chain variable fragment,scFv)構成，也可使用抗原的配體或受體識別靶細胞。胞內信號轉導區主要來源于T細胞受體的CD3ζ鏈，目前將僅包含CD3ζ的CAR稱為一代CAR，將包含一個共刺激因子CD28或4-1BB等的胞內區與CD3ζ串聯組成的CAR稱為二代CAR，將包含兩個共刺激因子的胞內區與CD3ζ串聯組成的CAR稱為三代CAR。由臨床前及臨床試驗證實，二代CAR和三代CAR比一代CAR具有更強的殺傷腫瘤細胞的能力，但二代CAR和三代CAR相比，三代CAR并沒有展現出明顯的優勢。