[發明專利]一種孕婦子癇前期的診斷試劑盒及診斷方法

在審

• 申請號: 201810123259.3
• 申請日: 2018-02-07
• 公開（公告）號: CN108624673A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 劉云峰;田慧艷;閆蒙;張立國;于明娟;王梅;鄧梓欣;劉明賢
• 申請（專利權）人: 新開源錦和河北生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 熊嫻;馮子玲

1.一種孕婦子癇前期的診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒檢測Foxp3的基因多態性位點，包括Foxp3-6054擴增組和Foxp3-3279擴增組，其中Foxp3-6054擴增組包括擴增如序列表SEQ ID NO：1所示Foxp3-6054片段的特異性引物，Foxp3-3279擴增組包括擴增如序列表SEQ ID NO：2所示Foxp3-3279片段的特異性引物。

2.根據權利要求1所述的孕婦子癇前期的診斷試劑盒，其特征在于，Foxp3-6054的特異性引物的基因序列如序列表SEQ ID NO：3和序列表SEQ ID NO：4所示。

3.根據權利要求1所述的孕婦子癇前期的診斷試劑盒，其特征在于，Foxp3-3279的特異性引物的基因序列如序列表SEQ ID NO：5和序列表SEQ ID NO：6所示。

4.根據權利要求1所述的孕婦子癇前期的診斷試劑盒，其特征在于：Foxp3-6054擴增組和Foxp3-3279擴增組均包括特異性引物、DNA聚合酶、dNTPs和擴增緩沖液。

5.根據權利要求1所述的孕婦子癇前期的診斷試劑盒，其特征在于：Foxp3-6054擴增組和Foxp3-3279擴增組還包括DMSO和/或牛血清蛋白。

6.根據權利要求4所述的孕婦子癇前期的診斷試劑盒，其特征在于：DNA聚合酶為熱啟動Taq酶。

7.一種采用根據權利要求1～6任一項所述的孕婦子癇前期的診斷試劑盒的診斷方法，其特征在于：所述擴增方法在同一體系中擴增Foxp3-6054模板和Foxp3-3279模板，使兩段DNA模板變性后在不同溫度下退火，其中Foxp3-6054模板先退火，退火完成后Foxp3-3279模板再退火，退火完成后在同一溫度下同時延伸。

8.根據權利要求7所述的孕婦子癇前期的診斷方法，其特征在于，擴增條件具體為：初始變性94℃保持5min，94℃變性30s，61℃退火2min，再降溫至50℃，退火2min，72℃延伸1min，30個循環。

9.根據權利要求7所述的孕婦子癇前期的診斷方法，其特征在于，本擴增方法中的擴增體系具體為25μL體系，其中包括：

模板DNA 150ng；

1×PCR buffer；

Cheetah Taq熱啟動酶1U；

dNTPs各200μM；

Foxp3-6054正向和反向引物各0.4μmol；以及

Foxp3-3279正向和反向引物各0.4μmol。

10.一種孕婦子癇前期診斷試劑盒在孕婦子癇前期診斷中的應用，其特征在于：所述試劑盒用于同時擴增Foxp3基因的Foxp3-6054位點和Foxp3-3279位點。