[發(fā)明專(zhuān)利]c-kit+心臟干細(xì)胞聚集體及分泌合成培養(yǎng)液在制備藥物中應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810120977.5
• 申請(qǐng)日: 2018-02-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108179133A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳鯤;楊膺;黃舒婷;謝博文;王奕翔
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/077
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/077;C12N5/0775;C12Q1/02;A61K35/34;A61P9/10
• 代理公司: 廣州三環(huán)專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;宋靜娜

1.一種c-kit⁺心臟干細(xì)胞聚集體的分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

s11)酶解消化心臟細(xì)胞，離心收集后并用細(xì)胞培養(yǎng)液重懸心臟細(xì)胞，即得心臟細(xì)胞懸浮液；

s12)將所述心臟細(xì)胞懸浮液加入包被有復(fù)合涂層的培養(yǎng)容器中，在培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；

s13)在顯微鏡鏡下用針頭將c-kit⁺心臟干細(xì)胞聚集體從復(fù)合涂層表面分離出，即得c-kit⁺心臟干細(xì)胞聚集體；

所述復(fù)合涂層的制備方法包括以下步驟：

s21)溶解：將親水聚合物A溶解于水中，攪拌均勻后獲得親水聚合物A溶解液；將親水聚合物B溶解于水中，攪拌均勻后獲得親水聚合物B溶解液；

s22)混合：將親水聚合物A溶解液與親水聚合物B溶解液混合、攪拌，即得復(fù)合涂層溶解液；

s23)滅菌和孵育：對(duì)所述復(fù)合涂層溶解液進(jìn)行過(guò)濾，過(guò)濾后的復(fù)合涂層溶解液加入到培養(yǎng)容器的表面，并置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行孵育；

s24)干燥：將孵育后的復(fù)合涂層溶解液置于無(wú)菌環(huán)境中，吸棄培養(yǎng)容器中剩余的水溶液，并進(jìn)行干燥；

在所述親水聚合物A溶解于水過(guò)程中，親水聚合物A與水的質(zhì)量比為0.1％～10％；在所述親水聚合物B溶解于水過(guò)程中，親水聚合物B與水的質(zhì)量比為0.1％～10％；在步驟s22)混合中，所述親水聚合物A為藻酸鹽或聚氧丙烯和聚氧乙烯構(gòu)成的聚醚，所述親水聚合物B為明膠、纖連蛋白或多聚賴(lài)氨酸。

2.如權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述心臟細(xì)胞取自于傳代一次至傳代五次之間的心臟細(xì)胞。

3.一種如權(quán)利要求1或2所述的分離方法制備的c-kit⁺心臟干細(xì)胞聚集體。

4.如權(quán)利要求3所述的c-kit⁺心臟干細(xì)胞聚集體在制備或篩選用于治療缺血性心肌病藥物中的應(yīng)用。

5.一種采用如權(quán)利要求3所述的c-kit⁺心臟干細(xì)胞聚集體制備的合成培養(yǎng)液。

6.一種如權(quán)利要求5所述的合成培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將分離的c-kit⁺心臟干細(xì)胞聚集體置于培養(yǎng)容器中，向培養(yǎng)容器中加入無(wú)血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)后收集細(xì)胞培養(yǎng)液；細(xì)胞培養(yǎng)液過(guò)濾后，即制備出合成培養(yǎng)液。

7.如權(quán)利要求5所述的合成培養(yǎng)液在制備或篩選用于治療缺血性心肌病藥物中的應(yīng)用。

8.一種用于治療缺血性心肌病的藥物，其特征在于，至少包含如權(quán)利要求3所述的c-kit⁺心臟干細(xì)胞聚集體和如權(quán)利要求5所述的合成培養(yǎng)液中的一種。

9.如權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于，還包含藥學(xué)上可接受的輔料。