[發(fā)明專利]一種產(chǎn)堿桿菌菌株及其馴化純化方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810120852.2
• 申請(qǐng)日: 2018-01-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108034627B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾茁桐;晏銘;肖嶸;趙承豪;鐘華;劉智峰;曾光明;湯琳;黃丹蓮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/36;C12N1/02;C02F3/34;A62D3/02;B09C1/10;C02F101/36;C02F101/34;C12R1/05;A62D101/22;A62D101/28
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務(wù)所(普通合伙) 43008
• 代理人: 黃麗

本發(fā)明公開(kāi)了一種產(chǎn)堿桿菌菌株及其馴化純化方法和應(yīng)用。該產(chǎn)堿桿菌菌株的名稱為產(chǎn)堿桿菌CJ01，保藏編號(hào)為CCTCC NO：M 2017571，該產(chǎn)堿桿菌菌株的馴化純化方法包括采樣、分離土著微生物、第一輪馴化、第二輪馴化、第三輪馴化、純化和保藏。該產(chǎn)堿桿菌菌株可應(yīng)用于降解2,2’,4,4’?四溴聯(lián)苯醚，實(shí)現(xiàn)降解效率高，降解產(chǎn)物對(duì)環(huán)境友好的優(yōu)點(diǎn)，克服現(xiàn)有厭氧微生物降解2,2’,4,4’?四溴聯(lián)苯醚技術(shù)的不足。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于有機(jī)污染物降解領(lǐng)域，涉及一種厭氧微生物及其篩選純化方法和在降解持久性有機(jī)污染物中的應(yīng)用，具體涉及一種高效降解2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚的產(chǎn)堿桿菌菌株及其篩選純化方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚是一類持久性有機(jī)污染物，具有高生物富集性和生物毒性。在多溴聯(lián)苯醚同類有機(jī)物中，2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚在環(huán)境介質(zhì)中的含量?jī)H次于十溴聯(lián)苯醚，但是2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚的毒性更大，主要表現(xiàn)在干擾生物體甲狀腺激素的正常分泌，并具有神經(jīng)毒性。

2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚的防治方法主要包括化學(xué)法和微生物法。但是，化學(xué)法具有以下缺點(diǎn)：一是化學(xué)藥劑昂貴，成本高；二是化學(xué)藥劑本身就是一種污染物，容易對(duì)環(huán)境造成污染；三是化學(xué)法降解產(chǎn)物的毒性更大，給環(huán)境造成二次污染。由于以上的缺點(diǎn)，限制了化學(xué)法在降解2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚污染中的應(yīng)用。

微生物法是一種經(jīng)濟(jì)環(huán)保的降解2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚的處理方法，但是2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚是一種低生物可利用性和高化學(xué)熱穩(wěn)定性的有機(jī)物，在厭氧條件下難以被微生物降解。經(jīng)過(guò)許多學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)，2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚可以被微生物厭氧降解的。但是，現(xiàn)在被證明能降解2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚的微生物不多，并且降解效率不高。所以，關(guān)于厭氧微生物降解2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚有待進(jìn)一步研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，特別是克服現(xiàn)有厭氧微生物降解2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚技術(shù)的不足，提供一種可高效降解2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚的產(chǎn)堿桿菌菌株及其馴化純化方法，還相應(yīng)提供該產(chǎn)堿桿菌菌株在去除2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚中的應(yīng)用，具有工藝簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)環(huán)保、降解效率高等優(yōu)點(diǎn)。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種產(chǎn)堿桿菌菌株，其特征在于，所述產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes sp.)菌株的名稱為產(chǎn)堿桿菌CJ01(Alcaligenes sp.CJ01)，其在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏編號(hào)為CCTCCNO：M2017571，保藏單位地址位于中國(guó)武漢大學(xué)，保藏日期為2017年10月9日。

本發(fā)明的產(chǎn)堿桿菌菌株具有以下特征：革蘭氏陰性菌，經(jīng)生理生化鑒定和分子生物學(xué)鑒定為產(chǎn)堿桿菌，主要生物學(xué)特征為：在斜面培養(yǎng)24h，形成乳白色菌落，菌落邊緣整齊光滑，在厭氧條件生長(zhǎng)良好；生理生化特性為V-P反應(yīng)、甲基紅反應(yīng)、硫化氫反應(yīng)和脲酶反應(yīng)呈陽(yáng)性，吲哚反應(yīng)和明膠液化反應(yīng)呈陰性，最適生長(zhǎng)溫度30℃，pH＝7。菌體16SrDNA序列如SEQNO：1所示。

作為一個(gè)總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的產(chǎn)堿桿菌菌株的馴化純化方法，包括以下步驟：

(1)采樣：從電子垃圾污染地區(qū)采取積水下面淤泥土壤樣品，備用；

(2)分離土著微生物：取步驟(1)所得土壤樣品置于無(wú)菌容器中，加入無(wú)菌超純水，經(jīng)密封振蕩后，取所得泥水混合液在無(wú)菌條件下進(jìn)行離心，所得上層清液即為土著微生物菌懸液；

(3)第一輪馴化：取培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，然后加入2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚的正己烷溶液，再加入步驟(2)的土著微生物菌懸液，通入氮?dú)獠⒚芊猓僭诒芄鈼l件下恒溫培養(yǎng)，得到第一輪馴化菌懸液；