[發明專利]一種CD138單抗靶向捕獲的細胞融合方法

在審

• 申請號: 201810120366.0
• 申請日: 2018-02-05
• 公開（公告）號: CN108315319A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 翁炳煥;李蘭娟;朱丹華;朱小明;溫馨
• 申請（專利權）人: 翁炳煥
• 主分類號: C12N15/06
• 分類號: C12N15/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種用于生物醫學領域的CD138單抗靶向捕獲的細胞融合方法，其特征是將待融合的B細胞和骨髓瘤細胞置于含有能連接B細胞和骨髓瘤細胞的CD138單抗、能活化B細胞的IL?3、IL?6、SCF、能增強B細胞IgGFc受體活性的IFN?γ、能與胞膜受體結合而易于膜融合的刀豆蛋白A的預融合劑中預處理，使骨髓瘤細胞表位CD138剛好被CD138單抗全部結合，通過CD138單抗的IgGFc段靶向捕獲B細胞，形成骨髓瘤細胞?CD138單抗?B細胞的結合物，拉近細胞距離，易于胞膜接觸和特異融合，增加骨髓瘤細胞與B細胞的特異融合率，減少了B細胞與B細胞、骨髓瘤細胞與骨髓瘤細胞的無效融合。

技術領域

本發明涉及生物醫學領域CD138單抗靶向特異性捕獲的細胞融合方法。

背景技術

細胞融合是20世紀發展起來的一種細胞工程技術，可以在一定條件誘導下使兩個或多個 細胞(原生質體)相互接觸，進而發生膜融合、胞質融合和核融合，形成雜種細胞。

細胞融合所形成的新細胞(雜合細胞)得到了來自兩個父本細胞的遺傳物質，因而具有 新的遺傳學或生物學特性。細胞融合已成為細胞工程的核心技術之一，它不僅為核質相互關 系、基因調控、遺傳互補、腫瘤發生、基因定位、衰老控制等領域的研究提供了有力的手段， 而且在遺傳學、動植物遠緣雜交育種、發育生物學、免疫學、醫藥、食品以及農業等領域具 有廣泛的應用價值，它已成為雜交育種、單克隆抗體制備、動物克隆以及抗癌疫苗研發等現 代生物醫學研究中的一項關鍵技術。

人們很早就注意到了在自然條件下發生的細胞融合現象，首先在病料組織中發現了由細 胞融合產生的多核細胞，緊接著發現在脊椎動物和無脊椎動物的正常細胞中也可發生細胞融 合，隨后在體外組織培養中也發現了離體細胞的融合現象。自從發現活病毒可在體內介導癌 細胞融合后，人們又實現了利用滅活病毒促進動物異種細胞融合，從而打破了細胞融合的種 屬屏障，推動細胞融合技術躍上新的臺階。

1974年發現了聚乙二醇(PEG)能促使植物原生質體融合，當加入一定分子量的PEG時， 融合效率較病毒誘導法可提高1000倍以上，經過研究發現PEG在融合過程中起著穩定和誘 導凝集作用。后來人們又發現還有許多其他的化學劑可使細胞凝集并融合，如磷酸鹽、高級 脂肪酸衍生物、脂質體等，但以聚乙二醇的效果較好。所以1975年以后，利用PEG誘導細胞 融合逐漸發展成為一種重要的化學融合方法，PEG法一直沿用至今，即使到了近年來已不斷 發展為電穿孔或電融合的電場誘導法、激光誘導法、微流控芯片法、高通量芯片法的今天， 因新方法的設備和實驗費用昂貴等原因，PEG法依然以其低廉的實驗成本和相對較高的融合 率而在許多實驗中依然被大量應用，最常用的是淋巴細胞雜交瘤技術，又稱為單克隆抗體技 術，是將特異抗原免疫的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞株在含有PEG(1000-2000)的選擇培養基 中進行融合，得到既能產生單克隆抗體又能在體外無限擴增的雜交瘤細胞株。以此制備的單 克隆抗體已經商品化，已廣泛應用于研究許多疾病的診斷、治療和預防。

縱觀細胞融合技術的發展歷史，該技術的不斷改進首先表現在融合劑上，從致癌活病毒 到滅活病毒再到化學物質，其次體現在新方法上，再者體現在融合對象的不斷擴展上。現在 新的細胞融合方法一般采用將化學法和物理法結合起來進行，如將磁、超聲、機械等和激光、 電相結合，同時添加化學劑以便進一步提高融合率，細胞融合的方法和手段始終朝操作方便、 簡單，便于量化研究，同時融合率又能得到不斷提高的方向發展。

PEG有不同的聚合產物，其相對分子質量分別為1000/2000/4000/6000/12000及20000 等，相對分子質量為1000-6000的PEG均可用作促融劑。PEG處理時間越長，細胞融合效果越 好，但對細胞的毒害也就越大；PEG的分子量及其濃度與細胞融合效果成正比，但PEG的分 子量越大、濃度越高，對細胞的毒性也就越大.所以在實驗時常采用的PEG分子量一般為 1000-4000，濃度一般為40-60％。如此有效融合劑量的PEG仍對細胞有很大的毒性作用。

發明內容