[發明專利]一種青枯病菌噬菌體微生態制劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810119605.0
• 申請日: 2018-02-06
• 公開（公告）號: CN108034639B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 林茂;姜宗然;付漢清;郭立
• 申請（專利權）人: 廈門昶青生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12Q1/04
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種青枯病菌噬菌體微生態制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將青枯病菌液接入發酵培養基中培養，得到宿主發酵液；青枯病菌在發酵培養基中初始菌體濃度為10⁸～10¹⁴CFU/ml；

2)將濃度為10¹⁰～10¹⁴PFU/ml的青枯病菌噬菌體液接種至所述宿主發酵液中發酵培養；青枯病菌噬菌體液的接種量為1％～10％；

3)所述步驟2)中發酵培養進行至8～20h時，向所述步驟2)中的宿主發酵液中流加青枯病菌液，繼續發酵培養，控制整個發酵周期為24～48h，得到發酵液，所述青枯病菌液的流加體積為宿主發酵液體積的1％～10％，青枯病菌液的濃度為10¹⁰～10¹⁴PFU/ml；

4)將所述步驟3)中得到的發酵液進行滅活青枯病菌宿主，得到青枯病菌噬菌體微生態制劑。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3)中每小時流加青枯病菌液的體積為宿主發酵液體積的0.7％～10％。

3.根據權利要求1～2任意一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3)中青枯病菌液的流加時間為6～12h。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1)中發酵培養基包括以下含量組分：蛋白胨5～15g/L、牛肉浸粉1～10g/L和氯化鈉1～10g/L；所述發酵培養基的pH值為6.5～8.0。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)和步驟3)中的發酵培養條件獨立如下：發酵溫度為25～32℃，宿主發酵液的pH值維持6～9；發酵在攪拌條件下進行，攪拌轉速為50～200rpm。

6.根據權利要求1～2、4和5任意一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟4)中滅活的方法為水浴；水浴的溫度為45～70℃；水浴的時間為2～5h。

7.權利要求1～6任意一項所述方法制備的青枯病菌噬菌體微生態制劑，其特征在于，青枯病菌噬菌體的效價為10¹³～10¹⁶PFU/ml。

8.權利要求7所述的青枯病菌噬菌體微生態制劑在植物保護中鑒定或檢測青枯病菌中的應用。