[發明專利]利用葉綠體InDel標記鑒別玉米S型胞質不育材料

有效

• 申請號: 201810119121.6
• 申請日: 2018-02-06
• 公開（公告）號: CN108220473B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 王鳳格;許理文;田紅麗;趙久然;王蕊;楊揚;葛建镕;劉文彬
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.葉綠體InDel標記在玉米S型胞質不育材料分子標記輔助育種中的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測玉米樣品的DNA；

2)以步驟1)提取的DNA為模板，利用SEQ ID NO:3-4或SEQ ID NO:5-6所示的引物，進行PCR擴增；

3)分析PCR產物。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，步驟2)中PCR反應體系為：DNA模板2μL，20μmol/L上、下游引物各0.25μL，2.5mmol/LdNTP 1.2μL，25mmol/L MgCl₂ 2μL，1單位Taq DNA聚合酶，10×PCR Buffer 2μL，ddH₂O補齊至20μL；

PCR反應程序為：94℃5min；94℃40s，60℃35s，72℃45s，35個循環；72℃10min，4℃保存。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，步驟3)采用瓊脂糖凝膠電泳或毛細管電泳檢測PCR產物。

4.葉綠體InDel標記在玉米S型胞質不育材料分子標記輔助育種中的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測玉米樣品的DNA；

2)KASP反應：向步驟1)提取的DNA模板中加入KASP Primer mix和KASP ROX standardreaction mix，進行PCR擴增；

3)采用熒光檢測儀分析PCR產物；

所述KASP Primer mix為SEQ ID NO:7和8所示引物5’端分別修飾不同熒光標簽序列后，與SEQ ID NO:9和10所示引物形成的混合物；或者，

所述KASP Primer mix為SEQ ID NO:11和12所示引物5’端分別修飾不同熒光標簽序列后，與SEQ ID NO:13所示引物形成的混合物；

其中，所述熒光標簽序列為：5’-FAM-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；

5’-HEX-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，步驟2)中PCR反應體系為：DNA模板1.5μL，KASP ROX standard reaction mix 0.5μL，KASP Primer mix 0.014μL，ddH₂O 0.5μL；所述KASP Primer mix中各引物的濃度為100μM；

PCR反應程序為：94℃15min；94℃20s，61-55℃1min，每個循環降低0.6℃，10個循環；94℃20s，58℃1min，30個循環。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟3)采用熒光檢測儀分析PCR產物。