[發(fā)明專利]玉米葉綠體基因組的分子標(biāo)記及在品種鑒定中的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810119096.1 | 申請日： | 2018-02-06 |
| 公開（公告）號： | CN108486266B | 公開（公告）日： | 2022-06-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王鳳格;楊揚;易紅梅;田紅麗;趙久然;許理文;王蕊;劉亞維 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京市農(nóng)林科學(xué)院 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;黃爽 |
| 地址： | 100097 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 玉米 葉綠體 基因組 分子 標(biāo)記 品種 鑒定 中的 應(yīng)用 | ||
1.基于KASP技術(shù)開發(fā)的用于玉米品種鑒定的分子標(biāo)記的引物組合，其特征在于，所述分子標(biāo)記包括以下57個SNP標(biāo)記和6個InDel標(biāo)記，它們的信息如下：
其中用于檢測標(biāo)記CPMIDP01的KASP引物包括上游引物1、上游引物2和下游引物1、下游引物2，序列為SEQ ID NO:301-304。
2.含有權(quán)利要求1所述引物組合的檢測試劑或試劑盒。
3.權(quán)利要求1所述引物組合或權(quán)利要求2所述檢測試劑或試劑盒在構(gòu)建玉米品種葉綠體DNA指紋圖譜中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述引物組合或權(quán)利要求2所述檢測試劑或試劑盒在玉米樣本母系溯源分析中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述引物組合或權(quán)利要求2所述檢測試劑或試劑盒在玉米樣本正反交鑒定中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1所述引物組合或權(quán)利要求2所述檢測試劑或試劑盒在玉米分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1所述引物組合或權(quán)利要求2所述檢測試劑或試劑盒在玉米品種鑒定中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：
1)提取待測玉米樣品的DNA；
2)KASP反應(yīng)：向步驟1)提取的DNA模板中加入KASP Primer mix和KASP ROX standardreaction mix，進(jìn)行PCR擴增；
3)采用熒光檢測儀分析PCR產(chǎn)物；
所述KASP Primer mix為權(quán)利要求1所述的各KASP引物中上游引物5’端分別修飾不同熒光標(biāo)簽序列后，與下游通用引物形成的混合物；
所述熒光標(biāo)簽序列為：5’-FAM-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；
5’-HEX-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟2)中PCR反應(yīng)體系為：DNA模板1.5μL，KASP ROX standard reaction mix 0.5μL，KASP Primer mix 0.014μL，ddH2O 0.5μL；所述KASP Primer mix中各引物的濃度為100μM；
PCR反應(yīng)程序為：94℃ 15min；94℃ 20s，61-55℃ 1min，每個循環(huán)降低0.6℃，10個循環(huán)；94℃ 20s，58℃ 1min，30個循環(huán)。
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