[發明專利]單克隆抗體1DB4在檢測IrrE轉基因農作物中的應用

有效

• 申請號: 201810118344.0
• 申請日: 2018-02-06
• 公開（公告）號: CN108396012B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 張維;周正富;劉奇;張君;陳明;林敏
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/12;G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超;王浩然

本發明提供了一種單克隆抗體，該抗體由保藏編號為CGMCC NO.12268的雜交瘤細胞分泌得到，同時提供了該抗體在檢測轉IrrE的轉基因農作物中的用途以及一種檢測轉IrrE的轉基因農作物的方法。本發明的單克隆抗體能夠用于抗旱耐鹽脅迫調控蛋白IrrE的WESTERN BLOT檢測，可檢測到重組IrrE蛋白及轉IrrE作物種子；對7種不同來源的各種非IrrE轉基因作物也不呈現交叉反應。

技術領域

本發明涉及農業生物技術領域，具體地，涉及一種雜交瘤細胞株、一種單克隆抗體及其在檢測轉IrrE的轉基因農作物中的用途和檢測轉IrrE的轉基因農作物的方法。

背景技術

耐輻射異常球菌(Deinococcus radiodurans)被公認為是迄今發現的具有最強電離輻射抗性的細菌菌株。這種非孢子形成的細菌對其損傷基因組的激活修復，使其能夠在極端劑量電離輻射中得以生存，并且不會受到致命損傷以及基因突變。耐輻射異常球菌擁有的修復機制使其對電離輻射的抗性比大腸桿菌高200倍以上。耐輻射異常球菌并不是僅被動的保護細胞抵抗電離輻射，同時還具有異乎尋常的準確DNA損傷修復能力。耐輻射異常球菌對多種形式的氧化脅迫具有很高的抗性。耐輻射異常球菌對于長期的干旱脅迫具有極高的抗性。相對濕度小于5％干旱環境處理6周并不能對耐輻射異常球菌的生存能力產生影響，耐輻射異常球菌R1經過這樣的干旱處理細胞生存力僅喪失15％。甚至有相關報道指出將耐輻射異常球菌進行干旱處理6年，菌體仍保留10％的生存力。這一存活效率對于不形成孢子的細菌來說非比尋常。

irrE基因位于耐輻射異常球菌基因組1號染色體上，ORF編號為DR0167。基因全長987-bp，編碼一個由328個氨基酸組成的35kDa蛋白。在已有的數據庫中并未發現IrrE蛋白的類似蛋白，鑒定其是異常球菌屬特異蛋白。近年來研究發現，耐輻射異常球菌中irrE基因是一個特有的、極其重要的DNA修復保護途徑的開關基因，對DNA損傷修復起重要的作用。研究認為irrE基因是一種新型的負責極端輻射抗性的啟動基因，在各種DNA損傷修復和保護輻射脅迫反應的途徑中起中心調控作用。同時，將該基因在大腸桿菌中表達能顯著提高其輻射抗性以及清除氧自由基的能力，而且irrE基因在大腸桿菌中表達顯著提高了菌株的高滲、高鹽、干旱等抗性。轉入irrE基因的大腸桿菌和油菜具有極高的耐鹽能力，因此該基因在培育抗旱耐鹽新品種作物上具有廣泛的應用前景

隨著社會的進步，越來越多的基于轉基因優良特性的轉基因作物商業化種植被國家批準，由此可能帶來的食品和環境安全問題引起了人們的高度重視。對轉基因作物或轉基因食品的檢測和鑒定不僅是相關法規的必然要求，也是滿足公眾知情權的必要技術。因此，建立有效、敏感、快速、準確的檢測方法，既是轉基因安全性評價的重要研究內容，也是進一步加強我國在轉基因作物和產品監管方面的重要技術保障。

在轉基因植物的研制開發或在對轉基因產品進行篩選或安全性評價時，往往需要對轉入的外源性基因進行定性或半定量測定。而單克隆抗體的使用是實施免疫學檢測技術的必要條件，高敏感性和特異性的單克隆抗體則是進一步優化反應的重要保證。

發明內容

本發明的目的是提供一種較高的敏感度和特異性的抗IrrE蛋白的單克隆抗體。

為了實現上述目的，一方面，本發明提供了一種雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞株的保藏編號為CGMCC NO.12268。

再一方面，本發明還提供了一種單克隆抗體，該單克隆抗體由保藏編號為CGMCCNO.12268的雜交瘤細胞株產生。

再一方面，本發明還提供了如上所述的單克隆抗體在檢測轉IrrE的轉基因農作物中的用途。

另一方面，本發明還提供了一種檢測轉IrrE的轉基因農作物的方法，其中，該方法包括如下步驟：S1、從待檢測的農作物中提取全蛋白；S2、對所述全蛋白使用如上所述的單克隆抗體進行免疫雜交；S3、如果免疫雜交結果中出現IrrE的陽性條帶，則指示待檢測的農作物為轉IrrE的轉基因農作物。