[發(fā)明專利]基于KASP技術(shù)的玉米雄性不育胞質(zhì)類型的鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810118136.0
• 申請(qǐng)日: 2018-02-06
• 公開（公告）號(hào): CN108486265B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王鳳格;田紅麗;王蕊;趙久然;楊揚(yáng);許理文;易紅梅;葛建镕;劉亞維
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京市農(nóng)林科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.基于KASP技術(shù)開發(fā)的用于鑒定玉米C型胞質(zhì)不育材料的分子標(biāo)記的引物組合，其特征在于，用于鑒定玉米C型胞質(zhì)不育材料的分子標(biāo)記包括以下9個(gè)SNP標(biāo)記和1個(gè)InDel標(biāo)記，它們的信息如下：

2.基于KASP技術(shù)的玉米C型胞質(zhì)不育材料的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測(cè)玉米樣品的DNA；

2)KASP反應(yīng)：向步驟1)提取的DNA模板中加入KASP Primer mix和KASP ROX standardreaction mix，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

3)采用熒光檢測(cè)儀分析PCR產(chǎn)物；

所述KASP Primer mix為權(quán)利要求1所述的各KASP引物中上游引物5’端分別修飾不同熒光標(biāo)簽序列后，與下游通用引物形成的混合物；

其中，所述熒光標(biāo)簽序列為：5’-FAM-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；

5’-HEX-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟2)中PCR反應(yīng)體系為：DNA模板1.5μL，KASP ROX standard reaction mix 0.5μL，KASP Primer mix 0.014μL，ddH₂O 0.5μL；所述KASP Primer mix中各引物的濃度為100μM；

PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃15min；94℃20s，61-55℃1min，每個(gè)循環(huán)降低0.6℃，10個(gè)循環(huán)；94℃20s，58℃1min，30個(gè)循環(huán)。

4.含有權(quán)利要求1所述引物組合的檢測(cè)試劑或試劑盒。

5.權(quán)利要求1所述引物組合或權(quán)利要求4所述檢測(cè)試劑或試劑盒在玉米樣品檢測(cè)、玉米分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用；

所述玉米為玉米C型胞質(zhì)不育材料。