[發明專利]一種生物素化抗體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810116100.9
• 申請日: 2018-02-06
• 公開（公告）號: CN108341867A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 李子樵;康紹樂
• 申請（專利權）人: 上海藍怡科技股份有限公司;浙江藍怡醫藥有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/107;G01N33/53
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種生物素化抗體的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)制備待生物素化的抗體蛋白的緩沖液體系；

(2)向待生物素化的抗體蛋白的緩沖液體系中加入生物素溶液，進行反應；

(3)將步驟(2)反應后的體系在緩沖液中進行滲析，而后進行純化處理，得到所述生物素化抗體。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述制備待生物素化的抗體蛋白的緩沖液體系的方法為：使用緩沖液將待生物素化的抗體蛋白稀釋至0.5-2mg/mL，而后在緩沖液中滲析得到所述待生物素化的抗體蛋白的緩沖液體系。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述緩沖液為碳酸鹽緩沖液；

優選地，使用緩沖液將待生物素化的抗體蛋白稀釋至0.1mg/mL；

優選地，所述碳酸鹽緩沖液的pH值為8.0-8.5；

優選地，所述碳酸鹽緩沖液中溶質的濃度為0.02-0.2mol/L。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述滲析時的溫度為2-10℃；

優選地，所述滲析每2-6小時更換一次滲析緩沖液，滲析12-48小時后得到所述待生物素化的抗體蛋白的緩沖液體系；

優選地，步驟(1)所述待生物素化的抗體蛋白為鼠抗人IgE抗體。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述生物素溶液為N-羥基琥珀酰亞胺生物素的二甲亞砜溶液；

優選地，所述生物素溶液的濃度為0.5-2mg/mL，優選1mg/mL；

優選地，步驟(2)中，相對于1mL所述待生物素化的抗體蛋白的緩沖液體系，加入的生物素溶液的體積為50-200μL。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述反應的溫度為2-10℃；

優選地，步驟(2)所述反應在攪拌下進行；

優選地，步驟(2)所述反應的時間為1-8小時。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述緩沖液與步驟(1)和步驟(2)的緩沖液相同，均為碳酸鹽緩沖液；

優選地，步驟(3)所述滲析的溫度為2-10℃；

優選地，步驟(3)所述滲析每2-6小時更換一次滲析緩沖液，滲析12-48小時后，進行純化處理；

優選地，所述純化處理為柱層析純化；

優選地，所述柱層析純化的方法為：將步驟(3)滲析后的樣品加于Sephadex G-25層析柱上，使用含有1％BSA的PBS緩沖液洗脫，收集第一洗脫峰洗脫液，得到純化的生物素化抗體；

優選地，所述PBS緩沖液的pH為6.8-7.4；

優選地，所述PBS緩沖液中溶質的濃度為0.02-0.2mol/L；

優選地，在步驟(3)純化后的生物素化抗體中加入0.1％疊氮化鈉，4℃保存備用。

8.根據權利要求1-7中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

(1)使用溶質的濃度為0.02-0.2mol/L、pH值為8.0-8.5的碳酸鹽緩沖液將待生物素化的抗體蛋白稀釋至0.5-2mg/mL，而后在所述碳酸鹽緩沖液中于4-10℃下滲析，每2-6小時更換一次滲析緩沖液，滲析12-48小時后得到所述待生物素化的抗體蛋白的緩沖液體系；

(2)向待生物素化的抗體蛋白的緩沖液體系中加入濃度為0.5-2mg/mL的N-羥基琥珀酰亞胺生物素的二甲亞砜溶液，相對于1mL所述待生物素化的抗體蛋白的緩沖液體系，加入的生物素溶液的體積為50-200μL，4-10℃下反應1-8小時；

(3)將步驟(2)反應后的體系在所述碳酸鹽緩沖液中于4-10℃下滲析，每2-6小時更換一次滲析緩沖液，滲析12-48小時后，將滲析后的樣品加于Sephadex G-25層析柱上，使用含有1％BSA的溶質濃度為0.02-0.2mol/L、pH為6.8-7.4的PBS緩沖液洗脫，收集第一洗脫峰洗脫液，得到所述生物素化抗體。