[發明專利]一種經蔗糖廢液發酵的復合微生態制劑及其制備方法

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• 申請號: 201810112892.2
• 申請日: 2018-02-05
• 公開（公告）號: CN108410752A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 陳永斌;楊太;伍東岳;吳明鳳
• 申請（專利權）人: 廣東金海潤生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/125;C12R1/225
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種經蔗糖廢液發酵的復合微生態制劑，其特征在于：活菌原料包括質量百分比為1:10的枯草芽孢桿菌和乳酸桿菌，接種發酵過程所采用的發酵培養基由蔗糖廢液配置而成。

2.根據權利要求1所述的經蔗糖廢液發酵的復合微生態制劑，其特征在于：所述發酵培養基的組分為：蔗糖廢液100克、蛋白胨 10 克、牛肉膏 10 克、酵母粉 5 克、葡萄糖 5 克、乙酸鈉 5 克、檸檬酸二胺 2 克、磷酸氫二鉀 2 克、硫酸鎂 0.58 克、硫酸錳 0.28 克、水1000ml、PH7.0 。

3.根據權利要求1或者2所述的經蔗糖廢液發酵的復合微生態制劑的制備方法，其特征在于，包括如下的步驟：

(1) 原菌種斜面培養 ：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌和乳酸桿菌分別在斜面中活化，之后分別置于 90mm 培養皿中進行單克隆純化，得枯草芽孢桿菌菌種和乳酸桿菌斜面菌種，備用 ；

(2) 原菌種液體培養 ：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅰ中，之后于 36℃ -39℃恒溫培養24小時得枯草芽孢桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅱ中，接著于 37℃下厭氧培養 1-2 天得乳酸桿菌原菌液；

(3) 一級種子培養 ：乳酸桿菌原菌液和枯草芽孢桿菌原菌液按 1：10 的菌量比分別接種于已滅菌的液體培養基Ⅰ中進行培養，得一級菌種；

(4) 二級種子培養：將所得的一級種子按 5％的接種量接種于已滅菌的液體培養基Ⅰ中，并于 36℃ -38℃下培養24小時得的二級種子；

(5) 成品培養：將所得的兩種二級種子按5％的接種量接種至已滅菌的發酵培養基中，并于 36℃ -38℃下培養24小時，獲得所述復合微生態制劑的成品；

其中，液體培養基Ⅰ的組分：牛肉浸粉 10 克、蛋白胨5克，磷酸氫二鉀 1 克、硫酸鎂0.5 克、瓊脂 20 克、水 1000ml、PH7.0-7.2 ；

液體培養基Ⅱ的組分 ：酵母粉 10 克、葡萄糖 10 克、乙酸鈉 2克、磷酸氫二鉀 1 克、硫酸鎂 0.5 克、水 1000ml、PH7.0-7.2 。

4.根據權利要求3所述的經蔗糖廢液發酵的復合微生態制劑的制備方法，其特征在于：所述步驟 (1) 枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：首先制備斜面培養基Ⅰ，并將斜面培養基Ⅰ置于121℃下滅菌30min；然后用接種環將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的斜面培養基Ⅰ中，并在36℃ -39℃恒溫培養24小時獲得枯草芽孢桿菌原菌液；

所述斜面培養基Ⅰ的組分為：牛肉浸粉 10 克、蛋白胨5克，磷酸氫二鉀 1 克、硫酸鎂0.5 克、瓊脂 20 克、 水 1000ml、PH7.0-7.2。

5.根據權利要求3所述的經蔗糖廢液發酵的復合微生態制劑的制備方法，其特征在于：所述步驟 (1) 中乳酸菌在斜面中活化的具體操作為：首先制備斜面培養基Ⅱ，并將斜面培養基Ⅱ置于 121℃下滅菌 30min；然后用接種環將乳酸菌接種于斜面培養基Ⅱ上，然后于36℃ -39℃下培養24小時獲得乳酸菌原菌液；

所述斜面培養基Ⅱ的組分為：酵母粉 10 克、葡萄糖 10 克、乙酸鈉 2克、磷酸氫二鉀1 克、硫酸鎂 0.5 克、水 1000ml、PH7.0-7.2。

6.根據權利要求3所述的經蔗糖廢液發酵的復合微生態制劑的制備方法，其特征在于：所述步驟 (5) 中所述發酵培養基的滅菌條件為121℃，滅菌時間為30min。