[發明專利]一種用于預測來氟米特藥物療效的SNP位點的試劑盒和方法

在審

• 申請號: 201810111993.8
• 申請日: 2018-02-05
• 公開（公告）號: CN108300779A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 杜予和
• 申請（專利權）人: 廣州和康醫療技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 袁燕清

一種用于預測來氟米特藥物療效及不良反應的SNP位點的方法和試劑盒，本發明涉及分子生物學和醫學領域，為檢測來氟米特藥物療效及不良反應風險密切相關的DHODH基因和CYP1A2基因的單核苷酸多態性位點(SNP)基因型來評估來氟米特在類風濕關節炎及其他疾病使用中的療效及不良反應風險，本發明提供了一種用于預測來氟米特藥物療效及風險的SNP位點的系統，所述的預測系統包括有特異序列引物、特異探針和報告探針。本發明的有益效果在于：提供了特異序列的引物、探針和報告探針，創新性地對一組來氟米特藥物療效及不良反應風險的基因位點進行檢測，預測類風濕關節炎及其他患者服用來氟米特后療效及不良反應的風險，利于患者的精準用藥。

技術領域

本發明涉及分子生物學和醫學領域，更具體的，本發明涉及一組來氟米特藥物療效及不良反應風險SNP位點的系統及試劑盒，通過同時檢測來氟米特藥物療效及不良反應風險密切相關的DHODH基因和CYP1A2基因的單核苷酸多態性位點(SNP)基因型來評估來氟米特在類風濕關節炎及其他疾病使用中的療效及不良反應風險。

背景技術

來氟米特是一種針對類風濕關節(RA)的慢作用抗風濕病藥物(DMARD)。以往的臨床試驗證實來氟米特治療的患者中有30-50％達到疾病活動度下降20％(ACR20)，此外與甲氨蝶呤聯用時療效亦很顯著。但是，仍有相當一部分患者對其無反應，此外高達40％的患者因為毒性而必須停止用藥；大約20-30％的患者出現胃腸道毒性(腹瀉、惡心和嘔吐)，這常出現于用藥早期且在長期服用后可能會自發緩解。對于傳統DMARDs無效的患者通常會考慮生物DMARDs，但生物DMARDs可能增加某些類型癌癥和感染的風險且價格昂貴。所以使用較為經濟且能降低復發率的藥物(例如來氟米特)仍是一種較好的選擇。因此，預測患者對來氟米特反應如何相當重要，但通常臨床判斷來氟米特的療效需要3個月時間，而與藥物反應相關的遺傳特征有助于早期在治療開始前進行預判，從而迅速幫臨床醫師確定治療選擇。

來氟米特的作用機制主要涉及對酶DHODH的抑制，而DHODH對嘧啶的從頭合成至關重要。通過抑制嘧啶的合成，T細胞的增殖受到抑制，編碼DHODH的基因位于第16號染色體的長臂上，長度約16kbp。Pawlik等人分析了DHODH基因第一個外顯子中的非同義SNP(rs3213422)，結果發現C等位基因與來氟米特治療反應增強相關，同時C等位基因還與治療的毒性風險下降相關。

來氟米特是一種前體藥物，在體內迅速被轉換特立氟胺(活性代謝產物)。細胞色素P-450酶CYP1A2負責將來氟米特代謝為特立氟胺，研究表明CYP1A2的基因多態性可能與來氟米特的毒性增加及血漿濃度的變化有關。有研究證實CYP1A2C734A的A等位基因毒性反應的風險增加9.7倍(P＝0.002,OR＝9.708,95％CI＝2.276,41.403)。

發明內容

為了解決上述提到的問題，本發明提供了一種可以預測患者對來氟米特反應如何的系統、試劑盒和方法。

一種用于預測來氟米特藥物療效及風險的SNP位點的系統，所述的試劑盒包括有：

如下特異序列引物：

如下序列特異探針：

如下序列報告探針：

一種用于預測來氟米特藥物療效及風險的基因型的試劑盒，所述的試劑盒包括有上述的特異序列引物、探針和報告探針。

一種用于預測來氟米特藥物療效及風險的SNP位點的方法，所述的方法包括如下步驟：首先進行PCR反應，實現擴增；再進行多重OLA反應，標記和連接；然后進行雜交反應，最后進行基因型的分析。