[發明專利]一種β-葡萄糖苷酶的固定化方法有效
| 申請號： | 201810109984.5 | 申請日： | 2018-02-05 |
| 公開（公告）號： | CN108148826B | 公開（公告）日： | 2021-09-10 |
| 發明（設計）人： | 李露;于世濤;劉仕偉;燕杰善 | 申請（專利權）人： | 青島科技大學 |
| 主分類號： | C12N11/087 | 分類號： | C12N11/087 |
| 代理公司： | 北京金碩果知識產權代理事務所(普通合伙) 11259 | 代理人： | 李丹鳳 |
| 地址： | 266042 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 葡萄 糖苷酶 固定 方法 | ||
1.一種β-葡萄糖苷酶的固定化方法，其特征在于：以Eudragit L-100為載體，固定化修飾β-葡萄糖苷酶，制備得到固定化β-葡萄糖苷酶；其中，所述修飾β-葡萄糖苷酶是以單甲氧基聚乙二醇丙醛（mPEG-ALD）為修飾劑，定點修飾β-葡萄糖苷酶制備而成的；
所述固定化修飾β-葡萄糖苷酶的反應條件為，Eudragit L-100載體溶液的體積濃度為0.1~5.0%，修飾β-葡萄糖苷酶溶液的體積濃度為1~10 mg/mL，V載體溶液:V酶液=1:1~6:1；固定化反應的pH值為7.0~13.0，反應溫度為15~50℃，反應時間為30~200 min；最后需用3 M的醋酸調節pH值為4.0，10000 rpm下離心10 min，將沉淀溶解于pH值為5.2的磷酸緩沖液中，即得到所需要的固定化β-葡萄糖苷酶；
修飾β-葡萄糖苷酶的具體制備方法為，在35℃溫度條件下，向 pH為4.8的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液中加入β-葡萄糖苷酶粉，待酶粉溶解后加入相對分子量為5000的單甲氧基聚乙二醇丙醛，1 h后加入氰基硼氫鈉，反應24 h，加入甘氨酸終止反應，透析24 h，即得到純化的修飾β-葡萄糖苷酶溶液。
2.如權利要求1所述的固定化方法，其特征在于：所述固定化修飾β-葡萄糖苷酶的反應條件為，Eudragit L-100載體溶液的體積濃度為0.5~2.0%，修飾β-葡萄糖苷酶溶液的體積濃度為1~4 mg/mL；固定化反應的pH值為9.0~12.0，反應溫度為20~35℃，反應時間為30~100min。
3.如權利要求1所述的固定化方法，其特征在于：所述β-葡萄糖苷酶來源于苦杏仁。
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