[發明專利]用于谷雨香茶樹鑒定的SSR引物及鑒定方法及應用

有效

• 申請號: 201810106703.0
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN108148922B
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 韋朝領;安焱林;劉升銳;郭凌霄;密孝增;程道杰
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

1.用于谷雨香茶樹鑒定的SSR引物，其特征在于，所述SSR引物包含5對引物，分別為：引物1：

上游引物：TACCCACACAGTAGACCAGA；

下游引物：AAACCACGAGATGAAGAAGA；

引物2：

上游引物：ATAACTTGGATTTTTGAACGCCT；

下游引物：ATAGTAGTTATGGTGGTGGCGTG；

引物3：

上游引物：GTGTTAGGGGACAGGGTAGG；

下游引物：TGGGGGGTCAATATGTATGG；

引物4：

上游引物：ACTGAAATCAGGCCAAAATC；

下游引物：ATCATAGCAGACCAACGACT；

引物5：

上游引物：TGGGTTTCTTAGAGGGGATA；

下游引物：TGGAGACAATGGAGGTAATG。

2.如權利要求1所述的用于谷雨香茶樹鑒定的SSR引物，其特征在于，所述引物1對應的特定位點SSR1序列如SEQ ID NO.11；所述SSR1位點兩側保守序列的左側序列如SEQ IDNO.12，所述SSR1位點兩側保守序列的右側序列如SEQ ID NO.13。

3.如權利要求1所述的用于谷雨香茶樹鑒定的SSR引物，其特征在于，所述引物2對應的特定位點SSR2序列如SEQ ID NO.14；所述SSR2位點兩側保守序列的左側序列如SEQ IDNO.15，所述SSR2位點兩側保守序列的右側序列如SEQ ID NO.16。

4.如權利要求1所述的用于谷雨香茶樹鑒定的SSR引物，其特征在于，所述引物3對應的特定位點SSR3序列如SEQ ID NO.17；所述SSR3位點兩側保守序列的左側序列如SEQ IDNO.18，所述SSR3位點兩側保守序列的右側序列如SEQ ID NO.19。

5.如權利要求1所述的用于谷雨香茶樹鑒定的SSR引物，其特征在于，所述引物4對應的特定位點SSR4序列如SEQ ID NO.20；所述SSR4位點兩側保守序列的左側序列如SEQ IDNO.21，所述SSR4位點兩側保守序列的右側序列如SEQ ID NO.22。

6.如權利要求1所述的用于谷雨香茶樹鑒定的SSR引物，其特征在于，所述引物5對應的特定位點SSR5序列如SEQ ID NO.23；所述SSR5位點兩側保守序列的左側序列如SEQ IDNO.24，所述SSR5位點兩側保守序列的右側序列如SEQ ID NO.25。

7.利用權利要求1所述的SSR引物對谷雨香茶樹的鑒定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

提取待測樣品總DNA；

利用權利要求1的5對SSR引物，擴增所述待測樣品的基因組DNA；

記錄所述待測樣品的每對引物的DNA擴增帶型；

根據所述DNA擴增帶型判斷所述待測樣品是否為谷雨香茶樹。

8.如權利要求7所述的谷雨香茶樹的鑒定方法，其特征在于，所述樣品總DNA的提取方法是采用改良的CTAB法；反應總體系為10μL，其中，50ng/μL的DNA溶液1μL,10μM上、下游引物各0.5μL,2×EsTaq MasterMix 5μL,ddH₂O 3μL。

9.如權利要求7所述的谷雨香茶樹的鑒定方法，其特征在于，所述擴增的過程為：94℃預變性5min,94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸45s，35次循環，72℃延伸10min；引物1上游引物的退火溫度為50.3℃，引物1下游引物的退火溫度為51.9℃；引物2上游引物的退火溫度為54.3℃，引物2下游引物的退火溫度為58℃；引物3上游引物的退火溫度為55.9℃，引物3下游引物的退火溫度為57.8℃；引物4上游引物的退火溫度為54.3℃，引物4下游引物的退火溫度為52.8℃；引物5上游引物的退火溫度為54.1℃，引物5下游引物的退火溫度為52.8℃。

10.權利要求1所述的SSR引物在鑒定谷雨香茶樹品種中的應用。