[發明專利]一種礬根花序軸離體再生體系建立的方法

有效

• 申請號: 201810105907.2
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN110122327B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 束曉春;王忠;嚴冬琴;李乃偉;鄭玉紅;莊維兵;張鳳姣;吳尤宏
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種礬根花序軸離體再生體系建立的方法，其特征在于，所述方法的具體步驟如下：

（1）外植體的選取與消毒：選取礬根花序軸作為外植體消毒處理；

（2）愈傷組織的誘導：取步驟（1）中處理得到的外植體小段，以斜面放置方式接種于誘導培養基中進行愈傷組織的誘導，培養溫度為25±2℃，暗培養10d，然后進行光照培養25d；所述誘導培養基為MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.02mg/L，pH值為5.8-6.0；

（3）愈傷組織的分化：將步驟（2）中誘導得到的愈傷組織，誘導25d后，切下，接入分化培養基進行不定芽分化，培養溫度為25±2℃；所述分化培養基為N6+CPPU 0.3mg/L+IBA0.01mg/L，pH值為5.8-6.0；

（4）不定芽的繼代增殖：將步驟（3）得到的不定芽切割后，接入繼代增殖培養基中進行繼代培養25d，培養溫度為25±2℃；所述繼代增殖培養基為MS＋6-BA0.2mg/L，pH值為5.8-6.0；

（5）根的誘導：將步驟（4）中繼代增殖得到的試管苗接入生根培養基中進行生根培養15d，培養溫度為25±2℃；所述生根培養基為MS+2.0mg/L IBA，pH值為5.8-6.0；

(6) 將培養瓶的瓶蓋打開，煉苗2-3天，將根浸泡在復合微生物制劑中15min后，然后移栽入扦插基質中；

所述復合微生物制劑為，短小芽孢桿菌發酵液：發根植物單胞菌發酵液：假絲酵母菌發酵液：產黃纖維單胞菌發酵液：草炭：磷酸氫二鈉重量比＝3：4：4：3：1：2；

所述短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)為ATCC No.700814；

所述發根植物單胞菌（Agrobacterium rhizogenes）為ATCC No.11325；

所述假絲酵母菌（Candida utilis）為ATCC No.22023；

所述產黃纖維單胞菌（cellulomonas flavigena）為ATCC No.482。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述復合微生物制劑的制備方法為：首先將短小芽孢桿菌：發根植物單胞菌：假絲酵母菌：產黃纖維單胞菌發分別按照常規方式活化，然后培養至菌液中活菌數達到10⁷個/克獲得發酵液，將上述發酵液按照質量比例3：4：4：3混合，按照重量配比添加草炭、磷酸氫二鈉即得。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒處理具體步驟為用清水沖洗干凈，然后用洗滌劑漂洗一次，流水沖洗后，于無菌操作臺上用75％乙醇消毒10-20s，立即倒入0.1％的升汞消毒12min，最后用無菌水洗滌并振蕩，將消毒完畢的花序軸切割為2cm長的小段。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述扦插基質為：按照2：2：1的體積比例將泥炭土、蛭石和珍珠巖混勻制備。