[發(fā)明專利]一種短小芽孢桿菌及其防治蠶核型多角體病毒感染的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810094532.4
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN108048372B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 萬永繼;周圍;劉仁華;王文慧;向庭婷;劉曉媛;盧延
• 申請（專利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P1/00;A61K35/742;A61P31/20;A23K10/18;A23K50/90;C12R1/07
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責(zé)任公司 50209
• 代理人: 文巍

本發(fā)明提供了一種短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus），保藏號為CCTCC M 2018057，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心。本發(fā)明所述短小芽孢桿菌對家蠶核型多角體病毒（BmNPV）具有顯著的抗感染作用，細胞學(xué)感染試驗顯示防治病毒感染的效果達到100%。本發(fā)明在國內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)了家蠶腸道微生物短小芽孢桿菌菌株（Bacillus pumilus SW41）具有顯著的抗病毒感染的活性，應(yīng)用于養(yǎng)蠶業(yè)防治蠶的病毒病具有廣闊的前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種短小芽孢桿菌SW41（Bacillus pumilus SW41）。

背景技術(shù)

家蠶核型多角體病毒病主要是由病毒（BmNPV）通過蠶的腸道感染而引起蠶嚴(yán)重發(fā)病的一類傳染性蠶病，目前是危害養(yǎng)蠶業(yè)最嚴(yán)重的病毒病之一，給養(yǎng)蠶業(yè)者帶來了巨大的經(jīng)濟損失，目前對該病的防治主要是通過對養(yǎng)蠶環(huán)境的化學(xué)藥物消毒及選育使用抗病品種。

短小芽孢桿菌是一類在環(huán)境中分布較為廣泛的細菌，多數(shù)種類對環(huán)境與生物是友好的，迄今在降解環(huán)境有害物質(zhì)及促進動植物生長方面已有一些應(yīng)用報道，但可作為腸道益生菌應(yīng)用于防治腸道病毒病的感染國內(nèi)外尚未有報道，本發(fā)明提供了應(yīng)用微生物從腸道內(nèi)防治病毒病感染的新途徑和新技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于家蠶核型多角體病毒病在養(yǎng)蠶業(yè)的嚴(yán)重危害性及防治現(xiàn)狀，本發(fā)明申請人開展了尋求應(yīng)用微生物防治該病毒病的研究，首次成功地分離到了具有顯著抗家蠶核型多角體病毒（BmNPV）感染的微生物。

本發(fā)明所涉及的具有顯著抗家蠶核型多角體病毒（BmNPV）感染的微生物，是從蠶的消化道及消化液中分離出的一株短小芽孢桿菌SW41（Bacillus pumilus SW41）。該菌株已于2018年1月24日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心（地址：中國武漢），其簡稱CCTCC，保藏號為CCTCC M 2018057。

菌株接種于普通牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基, 28℃培養(yǎng)24h，菌株出現(xiàn)半透明型和不透明型兩種不同的菌落形態(tài)，菌落顏色為乳白色，顯微鏡觀察，菌體呈桿狀，圓末端，單個或呈短鏈排列，1.2～1.5×2.0～4.0微米，能運動，革蘭氏陽性，芽孢1.0～1.2×1.5～2.0微米，橢圓形，中生或次端生。生長溫度區(qū)間15～45℃，生長適溫20～35℃，pH5.0～10.0。16S rDNA核心序列1542bp，根據(jù)形態(tài)學(xué)特征和16S rDNA核心序列比對SW41被鑒定為一種短小芽孢桿菌，記錄為Bacillus pumilus SW41，其16S rDNA核心序列在NCBI/GenBank的登錄號為HM584798。（圖1）。

SW41發(fā)酵上清液和無菌水處理后的病毒粒子BV分別加入到家蠶細胞中進行細胞培養(yǎng)，并連續(xù)觀察和比較感染情況，細胞學(xué)感染試驗結(jié)果顯示SW41發(fā)酵上清液處理區(qū)一直未有感染細胞，但空白處理區(qū)在48小時即可看到細胞感染并形成病毒多角體，96小時細胞破碎并釋放出病毒多角體，細胞學(xué)試驗結(jié)果顯示防治病毒感染的效果達100%。（圖2）。

SW41發(fā)酵上清液或菌體可應(yīng)用于添加到桑葉或飼料以及制作成含菌的粉狀飼料飼養(yǎng)家蠶，其感染試驗與空白對照相比防治效果可達50%~100%。

有益效果

1. 本發(fā)明申請人基于多年專注于研究蠶的腸道微生態(tài)，探索了腸道微生物與腸道病毒的互作關(guān)系，終于從蠶的消化液中分離鑒定出了一株腸道菌短小芽孢桿菌（Bacillus pumilusSW41）具有顯著抗家蠶核型多角體病毒（BmNPV）感染的活性，該發(fā)現(xiàn)在國內(nèi)外首次證明了動物腸道共生的個別微生物菌株具有拮抗腸道病毒感染的作用。

2. 本發(fā)明所述短小芽孢桿菌SW41對家蠶無致病性，作為腸道益生菌應(yīng)用于防治腸道病毒病的感染具有顯著的作用，本發(fā)明提供了應(yīng)用微生物從腸道防治病毒病感染的新途徑和新技術(shù)。