[發(fā)明專利]一種窖泥厭氧梭菌Clostridium的富集方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810093550.0 | 申請日： | 2018-01-31 |
| 公開（公告）號： | CN108034621A | 公開（公告）日： | 2018-05-15 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王艷麗;何宏魁;葛向陽;劉國英;王錄;李安軍;周慶伍;孟雅靜 | 申請（專利權(quán)）人： | 安徽瑞思威爾科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/02;C12R1/145 |
| 代理公司： | 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101 | 代理人： | 喬恒婷 |
| 地址： | 236826 安*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 窖泥厭氧梭菌 clostridium 富集 方法 | ||
1.一種窖泥厭氧梭菌Clostridium的富集方法，其特征在于包括如下步驟：
步驟1：窖泥樣品的采集
從窖齡≥30年且一直在連續(xù)使用的窖池中采集池底的新鮮窖泥，采集的窖泥樣品裝入大口徑螺口瓶或自封袋中密閉保存；
步驟2：配制厭氧梭菌富集的選擇性培養(yǎng)基
選擇性培養(yǎng)基為強化梭菌培養(yǎng)基；
步驟3：液體培養(yǎng)基除氧
向裝有步驟2配制的選擇性培養(yǎng)基的厭氧瓶中通入氮氣，至選擇性培養(yǎng)基的顏色由藍色變?yōu)闇\粉紅色或無色，再擰緊瓶口使其在密閉條件下高壓滅菌；
步驟4：窖泥的厭氧接種
將步驟1采集的窖泥樣品加入步驟3獲得的除氧、滅菌后的液體培養(yǎng)基中，擰緊瓶蓋使其密閉后混勻；
步驟5：厭氧梭菌的富集培養(yǎng)
將步驟4獲得的接種窖泥后的厭氧瓶置于恒溫培養(yǎng)箱中，34℃下恒溫培養(yǎng)7天，觀察產(chǎn)氣情況，按照相同的培養(yǎng)條件重復富集培養(yǎng)3-5次。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富集方法，其特征在于：
步驟2中選擇性培養(yǎng)基的配制方法如下：
將蛋白胨10.0g、牛肉粉10.0g、酵母粉3.0g、葡萄糖5.0g、可溶性淀粉1.0g、氯化鈉5.0g、乙酸鈉3.0g、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5g、瓊脂0.5g、0.1％的刃天青1.5mL混合，加超純水定容至1L，混合均勻后調(diào)節(jié)pH值為6.7-6.9，獲得厭氧梭菌富集的選擇性培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富集方法，其特征在于：
步驟3中，高壓滅菌的溫度為121℃，時間為20min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富集方法，其特征在于：
步驟4中，窖泥樣品的接種量為1-5％。
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