[發(fā)明專利]溴酚藍(lán)在作為檢測(cè)牛胰島素淀粉樣纖維探針和作為牛胰島素淀粉樣纖維抑制劑方面的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810093124.7
• 申請(qǐng)日: 2018-01-31
• 公開（公告）號(hào): CN108489941B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳志俊;李振華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 北京化育知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11833
• 代理人: 涂琪順

溴酚藍(lán)在作為檢測(cè)牛胰島素淀粉樣纖維探針和作為牛胰島素淀粉樣纖維抑制劑方面的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。熒光光譜圖顯示溴酚藍(lán)加到牛胰島素淀粉樣纖維溶液后，熒光強(qiáng)度是牛胰島素溶液與溴酚藍(lán)混合后的三倍多，由于溴酚藍(lán)與牛胰島素和牛胰島素淀粉樣纖維結(jié)合后熒光強(qiáng)度的明顯差異性，表明溴酚藍(lán)可以作為探針準(zhǔn)確檢測(cè)牛胰島素淀粉樣纖維。用溴酚藍(lán)追蹤監(jiān)測(cè)牛胰島素淀粉樣纖維的形成過程，第一階段熒光強(qiáng)度變化較為緩慢，第二階段熒光強(qiáng)度迅速增強(qiáng)，第三階段熒光強(qiáng)度變?yōu)檩^為平穩(wěn)。在制備牛胰島素淀粉樣的過程中，加入溴酚藍(lán)后，圓二色譜圖顯示牛胰島素的二級(jí)結(jié)構(gòu)沒有出現(xiàn)應(yīng)該有的變化，即溴酚藍(lán)的加入成功抑制了牛胰島素淀粉樣纖維的形成。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及溴酚藍(lán)在作為檢測(cè)牛胰島素淀粉樣纖維探針和作為牛胰島素淀粉樣纖維抑制劑方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

蛋白的錯(cuò)誤折疊導(dǎo)致的淀粉樣纖維生成是誘發(fā)很多相關(guān)疾病的關(guān)鍵因素。長(zhǎng)久以來(lái)，淀粉樣纖維的研究是近年來(lái)在化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)方面的重要課題。越來(lái)越多的研究主要是因?yàn)榈矸蹣永w維的產(chǎn)生與許多疾病直接相關(guān)，有關(guān)報(bào)道指出大概有幾十種疾病是因?yàn)樾纬傻矸蹣永w維引起的，例如：阿爾茲海默癥，帕金和亨廷頓病,海綿狀腦病，II型糖尿病，心率不齊，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，動(dòng)脈粥樣硬化，催乳素瘤，多神經(jīng)病等等。因此，對(duì)淀粉樣纖維的識(shí)別以及抑制的研究在推動(dòng)發(fā)展淀粉樣纖維形成的機(jī)理和促進(jìn)發(fā)展醫(yī)學(xué)診斷救治的手段上有著重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

溴酚藍(lán)的結(jié)構(gòu)式如下所示，溴酚藍(lán)可以特異性識(shí)別牛胰島素淀粉樣纖維。在作為檢測(cè)牛胰島素淀粉樣纖維探針和作為牛胰島素淀粉樣纖維抑制劑方面得到應(yīng)用。

附圖說(shuō)明

圖1：在牛胰島素溶液(曲線1)與牛胰島素淀粉樣纖維溶液(曲線2)中分別加入溴酚藍(lán)水溶液的熒光光譜圖；

圖2：利用溴酚藍(lán)監(jiān)測(cè)牛胰島素淀粉樣纖維形成過程的相對(duì)熒光強(qiáng)度曲線圖； I₀為溴酚藍(lán)水溶液的熒光強(qiáng)度，I為將溴酚藍(lán)水溶液加入牛胰島素后溶液的熒光強(qiáng)度。

圖3：不加入溴酚藍(lán)的溶液，牛胰島素在25mM、NaCl/HCl(pH＝1.6),65℃條件下孵育0min和600min的圓二色譜圖(縱坐標(biāo)表示橢圓率，橫坐標(biāo)表示波長(zhǎng))；

圖4：加入溴酚藍(lán)的溶液，牛胰島素在25mM、NaCl/HCl(pH＝1.6),65℃條件下孵育0min和600min的圓二色譜圖(縱坐標(biāo)表示橢圓率，橫坐標(biāo)表示波長(zhǎng)。儀器：圓二色譜儀)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

PBS緩沖液配方：19mL、0.2M NaH₂PO₄水溶液和81mL、0.2M Na₂HPO₄水溶液的混合。配制1mM溴酚藍(lán)水溶液，取0.02mL溴酚藍(lán)水溶液分別加入到0.01mL、2.5mM牛胰島素的PBS緩沖液溶液(牛胰島素在PBS緩沖液中可以穩(wěn)定存在，不會(huì)生成淀粉樣纖維)中和0.01mL、2.5mM牛胰島素淀粉樣纖維 NaCl/HCl溶液中(用HCl調(diào)節(jié)NaCl水溶液的pH＝1.6，然后將牛胰島素加入到 NaCl水溶液中，牛胰島素的濃度為2.5mM，在65℃條件下孵育3小時(shí)，得到牛胰島素淀粉樣纖維溶液；NaCl水溶液中NaCl的濃度是25mM)，再加入0.97mL PBS緩沖液稀釋，將上述溶液放到熒光光譜儀中測(cè)試其熒光強(qiáng)度。熒光光譜圖顯示溴酚藍(lán)加到牛胰島素淀粉樣纖維溶液后，熒光強(qiáng)度是牛胰島素溶液與溴酚藍(lán)混合后的三倍多，如圖1。由于溴酚藍(lán)與牛胰島素和牛胰島素淀粉樣纖維結(jié)合后熒光強(qiáng)度的明顯差異性，表明溴酚藍(lán)可以作為探針準(zhǔn)確檢測(cè)牛胰島素淀粉樣纖維。

實(shí)施例2：