[發明專利]一種食竇魏斯氏菌及其應用、篩選檢定方法

有效

• 申請號: 201810093014.0
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN108060102B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 關皓;閆艷紅;張新全;帥楊;李小鈴;李小梅;黃琳凱;聶剛;汪霞;黃婷
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12Q1/689;C12Q1/04;A23K30/18;C12R1/01
• 代理公司: 成都市集智匯華知識產權代理事務所(普通合伙) 51237
• 代理人: 李華;溫黎娟

本發明公開一種食竇魏斯氏菌及其應用、篩選檢定方法，所述食竇魏斯氏菌(Weissella cibaria)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.15075；所述食竇魏斯氏菌生長速率快，產酸效率高；所述食竇魏斯氏菌作為牧草青貯添加劑，提升牧草青貯飼料的品質，具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及一種食竇魏斯氏菌及其應用、篩選檢定方法。

背景技術

青貯是通過乳酸菌的增殖，將原料中的發酵底物轉化成乳酸等酸性物質，維持酸性厭氧環境，以利于青貯作物長期保存的一種貯藏方式。青貯飼料顏色黃綠、氣味酸香、柔軟多汁、適口性好，在畜牧業生產中廣泛應用，尤其在反芻動物飼養中，已成為重要的優質粗飼料來源。

乳酸菌是近年來正在推廣的青貯微生物添加劑，其主要作用是調節青貯物料內微生物組成，迅速成為優勢菌群，競爭抑制有害微生物生長轉化有限的糖分，降低青貯pH值，從而提高青貯飼料的質量，不同的青貯物料其發酵特性存在不同，而目前適用于青貯的乳酸菌品種單一，不能滿足市場需求。

發明內容

有鑒于此，本申請提供了一種食竇魏斯氏菌，所述食竇魏斯氏菌生長速率快，產酸效率高；食竇魏斯氏菌作為牧草青貯添加劑，發酵類型為同型發酵，能快速降低牧草青貯pH值，使乳酸菌成為優勢菌群，加快發酵成熟，減少氨態氮的產生以及增加了有機酸含量，提高了青貯飼料的發酵品質，從而提高牧草青貯飼料干物質含量，干物質回收率、粗蛋白含量，降低了纖維含量，提升牧草青貯飼料的質量，具有廣泛的應用前景。

為解決以上技術問題，本發明提供的技術方案是一種食竇魏斯氏菌，所述食竇魏斯氏菌(Weissella cibaria)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCCNo.15075，保藏日期為2017年12月18日；

上述食竇魏斯氏菌的16s rDNA如SEQ ID NO.1所示。

本發明還提供了上述述食竇魏斯氏菌在制備牧草青貯添加劑中的應用。

優選的，所述食竇魏斯氏菌在制備狼尾草屬牧草青貯和牛鞭草屬牧草添加劑中的應用。

優選的，所述狼尾草屬牧草為狼尾草屬牧草為桂牧1號雜交狼尾草、桂閩引象草。

優選的，所述牛鞭草屬牧草為牛鞭草。

本發明還提供了上述食竇魏斯氏菌的篩選檢定方法，包括以下步驟：

1)取牧草樣品，稀釋后吸取涂布至MRS固體培養基培養，挑出單菌落養繼續培養后，連續傳代培養不少于2次，得到純化的菌落；

2)將步驟1)得到的所述純化的菌落在乳酸菌固體培養基上恒溫厭氧條件下培養后，通過革蘭氏染色和過氧化氫酶接觸反應，進行乳酸菌的鑒定，將鑒定后的乳酸菌加入含滅菌甘油的液體營養培養基中，并儲存，得到分離純化的乳酸菌；

3)將步驟2)得到的所述分離純化的乳酸菌進行菌種活化后，接種到MRS液體培養基中培養，得到菌液；測定所述菌液pH與OD值，根據測定結果進行篩選pH＝3.76，OD值＝1.641的菌液，得到初步篩選后的菌株；

4)將步驟3)得到的所述初步篩選后的菌株進行厭氧培養后，進行單株菌的DNA提取，以提取的DNA為模板進行PCR擴增得到擴增產物，所述擴增產物即為所述食竇魏斯氏菌。

優選的，所述步驟具體包括：

1)取牧草樣品，加入無菌蒸餾水，稀釋成10^-1，10^-3和10^-5三個稀釋度的樣品稀釋液；吸取樣品稀釋液涂布至MRS固體培養基培養，連續傳代培養2次，得到純化的菌落；