[發(fā)明專利]蘋果矮化砧木通過組織培養(yǎng)獲得自根砧苗的方法

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• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108094215A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設計）人: 王國平;陳秋芳;史華平;樊新萍;劉偉;王騫;李海芳
• 申請（專利權）人: 山西省農(nóng)業(yè)科學院果樹研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;A01G24/28;A01G24/15
• 代理公司: 太原科衛(wèi)專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源;武建云

1.一種蘋果矮化砧木通過組織培養(yǎng)獲得自根砧苗的方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）、‘Y-1’蘋果矮化砧木無菌單芽莖段的獲得

五月上旬，將‘Y-1’蘋果矮化砧木新生枝條從基部剪下，去掉葉片和葉柄，裝入保鮮袋中，進行無菌化處理；

（2）、‘Y-1’蘋果矮化砧木初培嫩莖的獲得

將無菌的單芽莖段與藥液接觸兩端各切掉0.5cm，植入準備好的初培培養(yǎng)基中；初培培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑BA 2.0mg/l和IBA 0.5mg/l，放培養(yǎng)室進行培養(yǎng)；培養(yǎng)室環(huán)境條件為：光照時間16小時，溫度25℃，濕度70%；培養(yǎng)20~25天，芽萌發(fā)長2~3cm時，進行繼代；

（3）、‘Y-1’蘋果矮化砧木的繼代

將步驟（2）中的萌發(fā)芽在超凈工作臺上，從其基部剪下，接種到經(jīng)過滅菌的繼代培養(yǎng)基；繼代培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑BA 0.6mg/l、IBA 0.3mg/l和GA30.5mg/l；

在培養(yǎng)室中培養(yǎng)25天，單芽已經(jīng)生長、分蘗成芽叢，繼續(xù)進行繼代；連續(xù)繼代5次以上，一部分材料繼續(xù)繼代，一部分材料進行生根培養(yǎng)；繼代培養(yǎng)中，培養(yǎng)室培養(yǎng)條件同步驟（2）；

（4）、‘Y-1’蘋果矮化砧木的生根

將步驟（3）中繼代材料高度為2cm以上的嫩莖，在超凈工作臺上用剪刀剪下，接種到經(jīng)過消毒滅菌的生根培養(yǎng)基中，放培養(yǎng)室中培養(yǎng)；生根培養(yǎng)基為：1/2MS（大）培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑IBA 1.0mg/l；培養(yǎng)室環(huán)境條件同步驟（2），培養(yǎng)20天，根長0.5~1.0cm，且每株有3個根及以上，拿到室內(nèi)散射光下進行煉苗；

（5）、‘Y-1’蘋果矮化砧木的煉苗

裝有生根苗的培養(yǎng)瓶拿到室內(nèi)自然散射光下進行煉苗，10天時，將瓶蓋打開，注入無菌水，深度0.8cm，然后無蓋繼續(xù)煉苗三天，即可移栽；

將煉好的試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，放入盛有自來水的敞口玻璃杯中，輕輕攪動，將根部附著的培養(yǎng)基與根分離，反復沖洗三次，將洗好的試管苗放入有蓋的塑料箱中，運到移苗拱棚中進行移栽；

（6）、‘Y-1’蘋果矮化砧木的移栽

移苗拱棚內(nèi)溫度：白天25~28℃、晚上18~22℃，濕度70~90%，晴天11點到下午3點，遮蔭70%；移栽基質(zhì)為草炭、蛭石、珍珠巖混合基質(zhì)，基質(zhì)用800倍多菌靈滅菌，移苗盤用50孔塑料穴盤；每穴移栽一株試管苗，整盤移栽好后，用水噴透基質(zhì)，穴底有水滲出；

將移栽好的穴盤搬到移苗拱棚內(nèi)，再搭小拱棚保濕；每三天噴透水一次，一周開始放風，并開始噴營養(yǎng)液，每周一次；其中，營養(yǎng)液是由磷酸二氫鉀和尿素按質(zhì)量比為1:1配制成的濃度為0.5%的溶液；

移栽10天揭掉小拱棚塑料布，過一周將穴盤移到室外；在室外開始的一周，中午要遮蔭，兩周后移栽大田，進行常規(guī)管理。

2.根據(jù)權利要求1所述的蘋果矮化砧木通過組織培養(yǎng)獲得自根砧苗的方法，其特征在于：步驟（1）中，無菌化步驟為：首先將枝條用自來水沖洗半小時，并用肥皂水洗干凈；將枝條截成單芽莖段，放入盛有無菌水的瓶中，帶至無菌超凈工作臺上；其次，在無菌超凈工作臺上，將放有單芽莖段瓶中的無菌水倒掉，用裝有70% 醫(yī)用酒精的小噴壺將單芽莖段噴濕，30秒后，倒入0.1%的HgCI2溶液，能將所有單芽莖段完全浸泡即可；5分鐘后將HgCI2溶液收集到空瓶子中，浸泡好的單芽莖段用無菌水沖洗三次，備用。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的蘋果矮化砧木通過組織培養(yǎng)獲得自根砧苗的方法，其特征在于：步驟（6）中，移栽基質(zhì)中草炭、蛭石、珍珠巖的比例為1:1:1。