[發(fā)明專利]一種心室顫動基因鑒別診斷試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810092390.8
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108300778A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王繼征;宋雷;惠汝太;張禪那;鄒玉寶
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種心室顫動基因鑒別診斷試劑盒，其特征在于：該技術(shù)涉及一種應(yīng)用大規(guī)模平行測序平臺NGS技術(shù)檢測心室顫動基因鑒別診斷試劑盒。本發(fā)明的主要特征在于：A.獨特設(shè)計并制備捕獲探針，針對91個基因全部外顯子片段；B.設(shè)計獨特帶有標(biāo)簽序列的接頭；C.通用引物對探針序列進行PCR擴增；D.設(shè)計獨特的混合后目的片段的捕獲操作。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)診斷和生物技術(shù)，涉及一種心室顫動基因突變的體外診斷試劑盒，是一種應(yīng)用于新一代測序平臺NGS技術(shù)的一種心室顫動基因鑒別診斷試劑盒。

背景技術(shù)

心室顫動(ventricular fibrillation，VF)簡稱室顫，是指心室肌肉亂顫，心室規(guī)律有序的激動和舒縮功能消失，致使心臟失去排血功能，導(dǎo)致血壓急劇下降至零，心室顫動是功能性的心臟停跳。心室顫動是急性心肌梗死最為嚴重的并發(fā)癥之一，在心肌梗死急性期，心室顫動發(fā)生率為15％，約80％的心室顫動發(fā)生在梗死后6小時內(nèi)，極易引發(fā)猝死，其中梗死后1小時內(nèi)是心室顫動發(fā)生的最高時段。心室顫動的常見病因包括冠心病、心律失常、肥厚型心肌病、擴張型心肌病等。

其中，由心律失常轉(zhuǎn)化為的心室顫動主要包括：完全性或高度房室傳導(dǎo)阻滯、長Q-T間期綜合征伴尖端扭轉(zhuǎn)性室性心動過速、Brugada綜合征、Q-T間期正常型多形性室性心動過速和極短聯(lián)律間期型多形性室性心動過速、病理性陣發(fā)性持續(xù)性室性心動過速、致心律失常性右心室發(fā)育不良性室性心動過速等；

擴張型心肌病和肥厚型心肌病的室性心動過速發(fā)生率很高，其猝死病例在持續(xù)性室性心動過速組分別為56％，19％；非持續(xù)性室性心動過速組為5.4％，均發(fā)生于擴張性心肌病，猝死患者經(jīng)心電圖檢查證實，心室顫動占66％。

目前，Sanger測序作為傳統(tǒng)的測序技術(shù)，一次反應(yīng)只能對一段堿基序列進行測定，雖然精準(zhǔn)但是效率低，單核苷酸測序成本高。而針對具有遺傳異質(zhì)性的復(fù)雜疾病的研究，通常需要對數(shù)個甚至數(shù)十個基因的全部編碼區(qū)域進行測序以尋找有價值的突變信息，Sanger測序法不能滿足測序的要求。

近年，大規(guī)模DNA平行測序平臺(massively parallel DNA sequencingplatform)已經(jīng)發(fā)展為主流的基因測序技術(shù)，這項測序技術(shù)的出現(xiàn)不僅令DNA測序費用降到了以前的百分之一、千分之一，而且檢測的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性已經(jīng)大大提高，目前市場上的主要技術(shù)平臺已經(jīng)能夠達到99.99％的準(zhǔn)確性。特別是這項技術(shù)的高通量特性，使得以前花費半年或者一年以上時間進行的復(fù)雜遺傳疾病的基因檢測成為可能。本發(fā)明可以同時檢測幾十個甚至上百個病人的檢測，非常使用于地區(qū)性的檢測中心使用。

目前NGS技術(shù)將廣泛應(yīng)用，使研究人員對疾病與遺傳物質(zhì)關(guān)系的研究達到了新的高度。NGS技術(shù)診斷的優(yōu)勢在于：

1)方便，安全，快捷：僅抽取2-4毫升血；

2)任何時間都可以檢查；

3)不限制飲食，服藥，任何身體狀況都可以檢測；

4)相比反復(fù)，多項傳統(tǒng)檢查，更為經(jīng)濟；

5)發(fā)病前，疾病極早期診斷的唯一方式；

6)源頭確診，一次檢測，終身受益

本發(fā)明是在現(xiàn)有的NGS技術(shù)之上，通過自主設(shè)計捕獲全部目的基因的探針，并對探針和反應(yīng)體系的不斷優(yōu)化，不僅可以一次性檢測全部心室顫動的致病基因，更提高了檢測的準(zhǔn)確度，并極大的降低了測序的成本，使之廣泛用于臨床成為可能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是，提供一種心室顫動相關(guān)基因突變的目標(biāo)捕獲再測序的試劑盒。該試劑盒提高了基因捕獲的通量和基因平行測序的通量，操作簡便、成本低。