[發明專利]一種心室顫動基因鑒別診斷試劑盒

在審

• 申請號: 201810092390.8
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108300778A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 王繼征;宋雷;惠汝太;張禪那;鄒玉寶
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院阜外醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種心室顫動基因鑒別診斷試劑盒，其特征在于：該技術涉及一種應用大規模平行測序平臺NGS技術檢測心室顫動基因鑒別診斷試劑盒。本發明的主要特征在于：A.獨特設計并制備捕獲探針，針對91個基因全部外顯子片段；B.設計獨特帶有標簽序列的接頭；C.通用引物對探針序列進行PCR擴增；D.設計獨特的混合后目的片段的捕獲操作。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學診斷和生物技術，涉及一種心室顫動基因突變的體外診斷試劑盒，是一種應用于新一代測序平臺NGS技術的一種心室顫動基因鑒別診斷試劑盒。

背景技術

心室顫動(ventricular fibrillation，VF)簡稱室顫，是指心室肌肉亂顫，心室規律有序的激動和舒縮功能消失，致使心臟失去排血功能，導致血壓急劇下降至零，心室顫動是功能性的心臟停跳。心室顫動是急性心肌梗死最為嚴重的并發癥之一，在心肌梗死急性期，心室顫動發生率為15％，約80％的心室顫動發生在梗死后6小時內，極易引發猝死，其中梗死后1小時內是心室顫動發生的最高時段。心室顫動的常見病因包括冠心病、心律失常、肥厚型心肌病、擴張型心肌病等。

其中，由心律失常轉化為的心室顫動主要包括：完全性或高度房室傳導阻滯、長Q-T間期綜合征伴尖端扭轉性室性心動過速、Brugada綜合征、Q-T間期正常型多形性室性心動過速和極短聯律間期型多形性室性心動過速、病理性陣發性持續性室性心動過速、致心律失常性右心室發育不良性室性心動過速等；

擴張型心肌病和肥厚型心肌病的室性心動過速發生率很高，其猝死病例在持續性室性心動過速組分別為56％，19％；非持續性室性心動過速組為5.4％，均發生于擴張性心肌病，猝死患者經心電圖檢查證實，心室顫動占66％。

目前，Sanger測序作為傳統的測序技術，一次反應只能對一段堿基序列進行測定，雖然精準但是效率低，單核苷酸測序成本高。而針對具有遺傳異質性的復雜疾病的研究，通常需要對數個甚至數十個基因的全部編碼區域進行測序以尋找有價值的突變信息，Sanger測序法不能滿足測序的要求。

近年，大規模DNA平行測序平臺(massively parallel DNA sequencingplatform)已經發展為主流的基因測序技術，這項測序技術的出現不僅令DNA測序費用降到了以前的百分之一、千分之一，而且檢測的穩定性和準確性已經大大提高，目前市場上的主要技術平臺已經能夠達到99.99％的準確性。特別是這項技術的高通量特性，使得以前花費半年或者一年以上時間進行的復雜遺傳疾病的基因檢測成為可能。本發明可以同時檢測幾十個甚至上百個病人的檢測，非常使用于地區性的檢測中心使用。

目前NGS技術將廣泛應用，使研究人員對疾病與遺傳物質關系的研究達到了新的高度。NGS技術診斷的優勢在于：

1)方便，安全，快捷：僅抽取2-4毫升血；

2)任何時間都可以檢查；

3)不限制飲食，服藥，任何身體狀況都可以檢測；

4)相比反復，多項傳統檢查，更為經濟；

5)發病前，疾病極早期診斷的唯一方式；

6)源頭確診，一次檢測，終身受益

本發明是在現有的NGS技術之上，通過自主設計捕獲全部目的基因的探針，并對探針和反應體系的不斷優化，不僅可以一次性檢測全部心室顫動的致病基因，更提高了檢測的準確度，并極大的降低了測序的成本，使之廣泛用于臨床成為可能。

發明內容

本發明的目的是，提供一種心室顫動相關基因突變的目標捕獲再測序的試劑盒。該試劑盒提高了基因捕獲的通量和基因平行測序的通量，操作簡便、成本低。