[發明專利]萜類合酶及其應用

有效

• 申請號: 201810091964.X
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN110093329B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 葉紫玲
• 申請（專利權）人: 深圳艾格鑫科技有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12P5/00;C12P5/02;C12P7/02;C12P7/04
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明公開了萜類合酶及其應用。具體地，提供了該萜類合酶及表達該萜類合酶的質粒和載體用于催化萜類的合成或用于制備催化合成萜類的反應的催化劑的用途，還提供了制備萜類的方法。該萜類合酶可以特異性和高效地以萜類化合物前體物質為底物合成多種倍半萜化合物。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，具體地，涉及萜類合酶及其應用。

背景技術

倍半萜化合物是由2分子的異戊烯焦磷酸(IPP)以及1分子的二甲基丙烯焦磷酸(DMAPP)在法尼烯焦磷酸合成酶(farnesyl?pyrophosphate?synthase)催化下合成法尼烯焦磷酸(farnesyl?pyrophosphate，FPP)，隨后在倍半萜合酶催化下形成的。迄今為止，人們已至少發現122種不同的倍半萜類化合物骨架(Klapschinski?et?al.,2016)。其中一些骨架化合物，如5-7雙元環和3-5-6三元環倍半萜化合物具有抑菌、抗腫瘤等多種生物活性。但由于倍半萜類化合物僅含有3個異戊二烯單元，碳鏈的長度限制了其骨架的多樣性，這也大大增加了挖掘新的倍半萜骨架的難度。

由此，合成倍半萜的方法有待改進。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種新的萜類合酶，將其轉入含有高產萜類化合物前體物質的重組細胞內，能分離得到多個萜類化合物，尤其是倍半萜化合物，其中包括C₅-C₇雙元環倍半萜和C₃-C₅-C₆三元環倍半萜新骨架化合物，豐富了倍半萜化合物的骨架組成。

因而，根據本發明的第一方面，本發明提供了一種分離的多肽。根據本發明的實施例，所述分離的多肽具有SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列。該分離的多肽具有萜類合酶的活性，可以催化合成萜類化合物。

MPHKHVPLRPVKLTFDPVGSNTLGVPTLDFESLFREDSVSEDAPLVIYPEDMGVPWNTSLPWTRQSKFWAYAEAAGYEMANGISLDKASERGTLPMELMDERRKWKIDELVEDAISCCAYLYPTSSPTRLALLTQSVLLLFLHDDVIERGATQNETTVVDEFLSMAPKNRHLKKFWSDVLECDPVLGPDLLYAIHAFVRDGRVKSPFKQDHYATLADYMLYRRNDVGKTFMIAAIRFGSGVQQTREELAPFDELADLYVRHSILINDLYSYDKEVHEVKTIDASIVNAVAVTEQLLSVSPDLAKNLTRAITFDMEKEFYGICEKFMHSPDINDRQRVFVTALFDALTGNIFHSATLSRYVRHGERPLPCKC(SEQ?ID?NO：1)

如本文所用，“分離的多肽”是指所述多肽基本上不含天然與其相關的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質。本領域的技術人員能用標準的蛋白質純化技術純化所述多肽。基本上純的多肽在非還原聚丙烯酰胺凝膠上能產生單一的主帶。所述多肽的純度還可以用氨基酸序列進行進一步分析。

本發明的活性多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽。本發明的多肽可以是天然純化的產物，或是化學合成的產物，或使用重組技術從原核或真核宿主(例如，細菌、酵母、植物)中產生。

“萜”為脂肪族或環狀的基于異戊二烯單元(C₅H₈)的烴。“萜”包括但不限定為禾谷鐮刀二烯(fusariumdiene)，反式-禾谷鐮刀醇(trans-fusagramineol)，禾谷鐮刀醇(fusagramineol)、橙花叔醇、菖蒲醇(acorenol)，β-法尼烯，沒藥醇(bisabolol)，菖蒲二烯(Acoradiene)，順式-α-香檸檬烯，反式-α-香檸檬烯，(+)-epi-β-檀香萜，β-紅沒藥烯，和反式-γ-紅沒藥烯。