[發明專利]一種雞球蟲自噬相關蛋白Etatg6編碼基因序列及其獲取方法

在審

• 申請號: 201810090829.3
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN108085322A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 戚南山;林栩慧;孫銘飛;廖申權;呂敏娜;吳彩艷;李娟;胡俊菁;劉保臻;肖文婉;張健騑;謝明權
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所
• 主分類號: C12N15/30
• 分類號: C12N15/30;C12N15/10
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

本發明公開了一種雞球蟲自噬相關蛋白Etatg6編碼基因序列及其獲取方法，通過對E.tenella基因組數據庫的生物信息學分析發現自噬相關ATG6的同系物編碼基因，臨床分離E.tenella為模型，利用分子生物學方法成功擴增獲得全長為1356bp的Etatg6 ORF基因序列，對所獲得基因序列進行生物信息學分析發現其編碼長為451個氨基酸的自噬相關蛋白，從而首次為雞球蟲自噬的研究積累數據，為進一步篩選新型抗球蟲藥物靶標提供新的依據。

技術領域

本發明涉及生物基因工程技術領域，具體的說，涉及一種雞球蟲自噬相關蛋白Etatg6編碼基因序列及其獲取方法。

背景技術

柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella,E.tenella)是一類專性細胞內寄生的頂復門原蟲，可引起嚴重危害集約化養雞業生產的雞球蟲病。在無預防措施或預防失敗(如因抗藥性問題致藥物無效)的情況下，雞發病率可達30％-100％，致死率可高達80％。全球每年因雞球蟲病引起的經濟損失超過30億美元以上。

目前對雞球蟲病的控制仍主要是執行“在飼料中添加各種抗球蟲藥進行藥物防控”和“活卵囊疫苗進行疫苗防控”的技術方法，但雞球蟲廣泛而嚴重的抗藥性和公眾對藥物殘留的高度關注以及活卵囊疫苗仍存在潛在散毒危險性，正使這一技術體系的控制效果受到前所未有的挑戰，新的抗球蟲藥物及疫苗研制成為亟待解決的問題。

近年來在頂復門原蟲自噬相關研究中發現，抗球蟲藥物莫能霉素之所以能夠有效抑制弓形蟲等球蟲活性，是因為其可誘導蟲體自噬的發生，導致細胞功能紊亂而發生程序性死亡；抗瘧疾藥物氯喹通過抑制蟲體自噬體與溶酶體的融合從而抑制自噬的發生，介導蟲體死亡，達到抑制蟲體活性作用。因此，自噬對蟲體活性具有重要意義，調節自噬的發生可以誘導蟲體的死亡。鑒于此，本申請項目擬以對養雞業危害最為嚴重的柔嫩艾美耳球蟲為研究模型，深入研究自噬的發生對雞球蟲活性的影響，將為新型抗球蟲藥物的研制提供新的思路。

目前在酵母細胞中已發現35種自噬相關蛋白(ATG)，且大部分與哺乳動物細胞高度保守，按照功能大致分為自噬體形成相關自噬蛋白、自噬前體結構形成相關蛋白、自噬信號傳導相關蛋白、自噬體降解相關蛋白、線粒體自噬體形成相關蛋白及過氧化物酶自噬形成相關蛋白等六類相關自噬蛋白。其中自噬相關蛋白ATG6在自噬的發生、發展及成熟過程中都起著重要的調節作用：ATG6與Vps34連接ATG14形成PI3K復合體，參與自噬體的成核及膜延伸，促進自噬前體形成；其與Vps34連接Vps38形成復合體結合誘導自噬體成熟；其還可與Vps34連接Rubicon蛋白形成復合體在自噬晚期階段定位于溶酶體，參與自噬體與溶酶體的融合及講解過程。另有報道顯示ATG6同時參與了細胞自噬及細胞凋亡等兩種細胞程序性死亡過程。所有研究表明ATG6在細胞自噬的過程中發揮至關重要的作用，然而目前對雞球蟲的相關研究尚屬空白，因此對雞球蟲ATG6的深入研究，不僅為雞球蟲自噬的研究積累數據，更為雞球蟲病的防控開辟了新的前景。

發明內容

本發明的目的是提供了一種雞球蟲自噬相關蛋白Etatg6編碼基因序列及其獲取方法，根據E.tenella基因組數據庫找到ATG6的同系物蛋白編碼基因序列，根據序列設計特異性引物，以本研究室所保存廣東株E.tenella孢子化卵囊為材料提取總RNA，通過RT-PCR擴增Etatg6全長開放閱讀框(ORF)基因序列，從而為雞球蟲自噬的研究積累數據，為進一步篩選新型抗球蟲藥物靶標打下基礎。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種雞球蟲自噬相關蛋白Etatg6編碼基因序列，包括Etatg6全長ORF基因序列，所述的基因序列為：