[發明專利]一種生姜蛋白酶提取方法

有效

• 申請號: 201810089270.2
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN108048432B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 張祖姣;谷夢婷;沈玉平;柳壽增;易森
• 申請（專利權）人: 湖南科技學院
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種生姜蛋白酶提取方法，屬于生化技術領域。所述生姜蛋白酶的提取方法，將生姜漿液與磷酸緩沖液混合，得到的混合料液在0～4℃條件下靜置15～20min，將靜置后的混合料液進行固液分離，得到上清液；生姜漿液的質量與磷酸緩沖液的體積比為2g:2～4mL；所述磷酸緩沖液的pH值為6.0～7.0；將所述上清液與硫酸銨鹽混合，得到鹽析混合液；所述鹽析混合液中硫酸銨鹽飽和度為30～50％；將所述鹽析混合液經過在15～25℃條件下靜置提取，固液分離，得到沉淀和生姜蛋白萃余液，所述沉淀為生姜蛋白酶。采用硫酸銨沉淀法優化生姜蛋白酶的提取方法，提取得到的生姜蛋白酶的酶活力和比活力均較高。

技術領域

本發明屬于天然產物提取技術領域，具體涉及一種生姜蛋白酶提取方法。

背景技術

生姜(Zingiber officinale Roscoe)是一種藥食兼用蔬菜，有發汗解表，解毒，止嘔，殺菌等功效，是一種具有開發價值的經濟作物。其中羅平小黃姜質細纖小，辣味充足，含油量較高，色澤鮮美，芳香濃郁，風味獨特，是一種重要的香辛調味品。以羅平小黃姜鮮姜為原料加工制成的干姜、泡姜及其它腌制品更是風味獨特，易運輸保存等優點，是進一步精深加工、制藥、食品生產、保健日化產品生產的重要原料。在我國的河南、山東、云南、四川等地廣泛栽培。

開發利用的植物蛋白酶已經是工業、食品領域的研究方向。生姜蛋白酶是從生姜根莖中提取出的一種具有水解蛋白酶類，是一種由蛋白酶、凝乳酶、膠原酶組成的復合酶，是繼木瓜蛋白酶等多種植物蛋白酶發現的一種新的作用于肽鍵的一種巰基蛋白水解酶類。代景泉對生姜蛋白酶的深度研究發現，生姜蛋白酶是一種半胱氨酸蛋白酶，因結構與木瓜蛋白酶等相似，被歸為木瓜蛋白酶的新成員，屬于絲氨酸家族蛋白酶，其活性部位是半胱氨酸殘基上的巰基，具有蛋白酶和膠原蛋白酶的雙重性質，能特異水解由脯氨酸氨基組成的肽鍵。生姜蛋白酶在生產乳制品中具有分解作用，具有凝固豆乳和牛乳的作用，對酪蛋白、大豆分離蛋白等有很好的消化作用；生姜蛋白酶對肉類的嫩化；生姜蛋白酶用于酒類的澄清?；诖?，獲得高質量的生姜蛋白酶是人們的普遍追求。

目前，對于蛋白酶的提取方法有許多，其主要有沉淀法，超濾法等。沉淀法主要是鹽析沉淀法和有機溶劑提取法，具體包括硫酸銨沉淀法，丙酮沉淀法，乙醇沉淀法等。硫酸銨沉淀法提取生姜蛋白酶成本低，工藝簡單。經沉淀的粗酶粉，加入硫酸銨靜置沉淀，離心取沉淀，透析除鹽后冷凍干燥。但是現有技術中采用硫酸銨沉淀法提取得到的生姜蛋白酶普遍具有酶活力低的問題，不能滿足市場的需求。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種生姜蛋白酶提取方法，使所提取的生姜蛋白酶具有較高的酶活力。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種生姜蛋白酶的提取方法，包括以下步驟：

1)將生姜漿液與磷酸緩沖液混合，得到的混合料液在0～4℃條件下靜置15～20min，將靜置后的混合液進行固液分離，得到上清液；生姜漿液的質量與磷酸緩沖液的體積比為2g:2～4mL；所述磷酸緩沖液的pH值為6.0～7.0；

2)將所述步驟1)中得到的上清液與硫酸銨鹽混合進行鹽析，得到鹽析混合液；所述鹽析混合液中硫酸銨鹽飽和度為30～50％；

3)將所述鹽析混合液經過在15～25℃條件下靜置提取，將提取料液進行固液分離，得到沉淀和生姜蛋白萃余液，所述沉淀為生姜蛋白酶。

優選的，所述步驟1)中生姜漿液的質量與磷酸緩沖液的體積比為2g:3mL。

優選的，所述步驟1)中磷酸緩沖液的pH值為6.5。

優選的，所述步驟1)中磷酸緩沖液為包含以下含量的PB溶液：0.8～1.2mmol/LEDTA，4～6mmol/L L-半胱氨酸；所述PB溶液的摩爾濃度為0.05moL/L。