[發明專利]一種體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法

在審

• 申請號: 201810088383.0
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN108277255A
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發明（設計）人: 陳曉鳳
• 申請（專利權）人: 陳曉鳳
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N21/64
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251
• 代理人: 王法男

1.一種體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：通過人工合成帶上熒光的病毒，且帶上熒光的病毒能靶向感染活性上皮腫瘤細胞；將帶上熒光的病毒注入體外的人體混合液中，帶上熒光的病毒將在上皮腫瘤細胞中復制，熒光被放大，通過對混合液中帶上熒光病毒的識別，定位上皮腫瘤細胞，達到對上皮腫瘤細胞的檢測；利用病毒靶向感染活性上皮細胞的特性，以及病毒攜帶熒光，并復制放大熒光的多重特性提高上皮腫瘤細胞在特定混合液中被發現的敏感性和特異性進行上皮腫瘤細胞的檢測。

2.如權利要求1所述的體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：所述的帶上熒光的病毒為任何可以帶上熒光的病毒，且帶上熒光的病毒只靶向感染上皮細胞，并在靶向感染上皮腫瘤細胞中大量復制，使熒光放大，便于在背景中識別，定位該細胞；并且帶上熒光的病毒不感染血細胞，因此當帶上熒光的病毒與血液混合時，血細胞不會帶上熒光。

3.如權利要求2所述的體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：所述的帶上熒光的病毒靶向感染上皮細胞是靶向感染活性上皮腫瘤細胞，使該細胞帶上熒光，在24-72小時后在熒光顯微鏡下識別該細胞，定位該細胞；且帶上熒光的病毒感染上皮細胞是單個上皮細胞，或多個上皮細胞組成的上皮細胞團。

4.如權利要求3所述的體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：所述的帶上熒光病毒的熒光包括綠色熒光、紅色熒光或者其他種類熒光；熒光為單色熒光或雙色以上的熒光混合體，目的是進行熒光檢測或分離定位。

5.如權利要求4所述的體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：所述的熒光檢測或分離定位是聯合應用物理分離和免疫化學分離，互為補充，克服單一方法分離的缺點，顯著提高上皮腫瘤細胞發現和分離的效能。

6.如權利要求1所述的體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：所述的體外混合液是體外血液，或體外骨髓、胸水、腹水、腦脊液、淋巴液；所述體外混合液為血液時，所述上皮腫瘤細胞為循環血中腫瘤細胞，即單個循環血中腫瘤細胞（CTC），數個循環血中腫瘤細胞成團（CTM）。

7.如權利要求1所述的體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：所述的體外混合液是口腔、呼吸道、鼻腔、泌尿生殖道及消化道中排泄物，在排泄物上混有脫落的上皮腫瘤細胞，包括血痰、血尿、血便。

8.如權利要求1所述的體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：所述的混合液是細胞培養液。

9.如權利要求6至9任意一項權利要求所述的體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：所述的混合液包括了預先在實驗動物體內或研究對象人體內注入了上述特殊病毒后收集的混合物或者是預先收集了混合物再加注上述特殊病毒后的混合物。

10.如權利要求1所述的體外活性上皮腫瘤細胞的檢測方法，其特征在于：所述的對上皮腫瘤細胞的檢測包括以下步驟：

1）病毒的準備

將病毒帶上熒光，凍存至-80℃冰箱保存；

2）混合液準備

從待檢測的各種體液中收取定量的混合液，用物理或化學方法去除可能干擾結果的因素。

3）培養

將凍存病毒復蘇并過濾后加入處理后的混合液中，一起培養24~48小時，得到檢測液；

4）檢測

將檢測液分別在0h，24h，48h 熒光顯微鏡下觀察并記錄，通過熒光計數判斷檢測結果。