[發(fā)明專(zhuān)利]抗人RBP抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810087162.1
• 申請(qǐng)日: 2018-01-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108383906B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬永;趙利利;楊蕓;王安良
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇眾紅生物工程創(chuàng)藥研究院有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/18
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/18;C12N15/13;C12N15/81;C12N1/19;G01N33/68;C12R1/84
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本發(fā)明涉及抗人視黃醇結(jié)合蛋白抗體及其應(yīng)用。本發(fā)明制備了人視黃醇結(jié)合蛋白多種抗體，并進(jìn)行配對(duì)篩選，獲得靈敏度及特異性均能滿(mǎn)足需求的抗體組合(B08及B14)；同時(shí)其方便大量生產(chǎn)，可滿(mǎn)足日后大規(guī)模臨床應(yīng)用的需求。對(duì)上述抗體組合進(jìn)行檢測(cè)體系的調(diào)試優(yōu)化工作，獲得操作簡(jiǎn)便，靈敏度，特異性及相關(guān)檢測(cè)性能可滿(mǎn)足人臨床樣本檢測(cè)的人視黃醇結(jié)合蛋白的膠體金定量檢測(cè)卡，并可滿(mǎn)足人血液或尿液樣本檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的涉及兩種抗人視黃醇結(jié)合蛋白(Retinol-Binding Protein，RBP)抗體及其制備方法以及上述抗體在人視黃醇結(jié)合蛋白定量檢測(cè)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

視黃醇結(jié)合蛋白(Retinol-Binding Protein，RBP)由一條多肽鏈及小部分碳水化合物組成，分子量約21KD，半衰期3～12小時(shí)。RBP主要由肝臟合成，具有從肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)視黃醇至周?chē)M織的功能，廣泛分布于血液、腦脊液、尿液及其他體液中。在血液中，RBP與視黃醇、前白蛋白以1:1:1(mol)的復(fù)合物形式存在，轉(zhuǎn)運(yùn)體內(nèi)90％的視黃醇至機(jī)體組織。當(dāng)RBP與細(xì)胞表面的RBP受體結(jié)合時(shí)，視黃醇進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，復(fù)合物解體，游離的RBP從腎小球?yàn)V出，其中絕大部分被近端腎小管上皮細(xì)胞重吸收并被分解，供組織利用，僅少量從尿中排出。體內(nèi)鋅、鐵缺乏及嚴(yán)重感染等疾病能降低RBP的生物合成。

在蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良時(shí)，肝的蛋白質(zhì)合成不足并引起RBP不足，視黃醇不能進(jìn)入血液，視黃醇對(duì)RBP的分泌起調(diào)節(jié)作用，兩者呈正相關(guān)。RBP與前白蛋白一起參與維生素A的轉(zhuǎn)運(yùn)，血清RBP和血清維生素含量具有高度相關(guān)性，因此認(rèn)為RBP可作為反映維生素A缺乏的敏感指標(biāo)。另有研究表明，血清RBP水平是反映營(yíng)養(yǎng)性疾病療效的靈敏、特異性指標(biāo)。測(cè)定視黃醇結(jié)合蛋白能早期發(fā)現(xiàn)腎小管的功能損害，并能靈敏的反映腎近曲小管的損害程度，還可作為肝功能早期損害和監(jiān)護(hù)治療的指標(biāo)。臨床中，血清RBP定量檢測(cè)可用于各科室，如腎病科、ICU、急診科、內(nèi)分泌科、消化科、老年科、兒科等。

綜上，制備抗人視黃醇結(jié)合蛋白特異性抗體并應(yīng)用于制備人視黃醇結(jié)合蛋白定量檢測(cè)試劑盒具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一組能有效的、特異性結(jié)合人視黃醇結(jié)合蛋白的抗體。更具體地說(shuō)：

本發(fā)明的第一目的在于提供兩種抗人視黃醇結(jié)合蛋白抗體。

第一種抗人視黃醇結(jié)合蛋白抗體(B08)，

其重鏈可變區(qū)含有以下的互補(bǔ)決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2、和/或如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

以及其輕鏈可變區(qū)序列含有以下的互補(bǔ)決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2、和/或如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。

優(yōu)選的是本發(fā)明中的第一種抗人視黃醇結(jié)合蛋白抗體(B08)重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

第二種抗人視黃醇結(jié)合蛋白抗體(B14)，

其重鏈可變區(qū)含有以下的互補(bǔ)決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：9所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：10所示的HCDR2、和/或如序列SEQ ID NO：11所示的HCDR3；

以及其輕鏈可變區(qū)序列含有以下的互補(bǔ)決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：12所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：13所示的LCDR2、和/或如序列SEQ ID NO：14所示的LCDR3。