[發明專利]球形節桿菌生產的酮糖3-差向異構酶

有效

• 申請號: 201810085460.7
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN108315316B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 何森健;P.K.古洛帕利;新谷知也;吉川諒
• 申請（專利權）人: 松谷化學工業株式會社;株式會社希少糖生產技術研究所
• 主分類號: C12N9/90
• 分類號: C12N9/90;C12N11/00;C12P19/02;C12P19/24
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳;沈央

1.一種DNA，其中，

所述DNA編碼具有下述（A）、（B）的底物特異性的酮糖3-差向異構酶，

所述DNA由序列表中的序列號2或序列號3所示的堿基序列或者與其互補的堿基序列構成，

（A）將D-或L-酮糖的3位差向異構化，生成對應的D-或L-酮糖；

（B）在D-或L-酮糖中對D-果糖和D-阿洛酮糖的底物特異性最高。

2.如權利要求1所述的DNA，其中，

所述酮糖3-差向異構酶具有下述（a）~（f）的物理化學性質，

（a）分子量：

通過SDS-PAGE測定的亞單位的分子量為約32kDa，通過凝膠過濾法測定的分子量為120kDa，并且為亞單位的分子量為32kDa的同源四聚體結構；

（b）最佳pH：

在30℃下反應30分鐘，20mM的鎂離子Mg²⁺存在的條件下為6至11；

（c）最佳溫度：

在pH7.5下反應30分鐘，20mM的鎂離子Mg²⁺存在的條件下為60至80℃；

（d）pH穩定性：

在4℃下保持24小時的條件下至少在pH5至11的范圍內穩定；

（e）熱穩定性：

在pH7.5下保持1小時，4mM的鎂離子Mg²⁺存在的條件下在約50℃以下穩定，在鎂離子Mg²⁺不存在的條件下在約40℃以下穩定；

（f）通過金屬離子的活化：

通過二價錳離子Mn²⁺、二價鈷離子Co²⁺、鈣離子Ca²⁺以及鎂離子Mg²⁺活化。

3.如權利要求1或2所述的DNA，其中，

所述酮糖3-差向異構酶具有下述底物特異性（1）~（8），

（1）將D-果糖作為底物時的相對活性為43.8%；

（2）將D-阿洛酮糖作為底物時的活性為100%；

（3）將D-山梨糖作為底物時的相對活性為1.13%；

（4）將D-塔格糖作為底物時的相對活性為18.3%；

（5）將L-果糖作為底物時的相對活性為0.97%；

（6）將L-阿洛酮糖作為底物時的相對活性為21.2%；

（7）將L-山梨糖作為底物時的相對活性為16.6%；

（8）將L-塔格糖作為底物時的相對活性為44.0%，

其中，將D-阿洛酮糖的差向異構化活性作為100，將對各個酮糖的活性作為相對活性來表示。

4.如權利要求1或2所述的DNA，其中，

酮糖3-差向異構酶是D-阿洛酮糖異構酶。

5.一種載體，其中，

包含權利要求1~4中任意一項所述的DNA。

6.一種轉化體，其中，

包含權利要求5所述的載體。

7.一種酮糖3-差向異構酶的制造方法，其特征在于，

培養權利要求6所述的轉化體。

8.一種酮糖3-差向異構酶的制造方法，其特征在于，

培養權利要求6所述的轉化體，從得到的培養物中采集酮糖3-差向異構酶。