[發明專利]一種誘導肝細胞體外擴增的方法

有效

• 申請號: 201810083568.2
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN110093305B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 周琪;李偉;何正泉;王柳
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 閆桑田

本發明涉及一種誘導肝細胞體外擴增的方法。本發明還涉及Myosin抑制劑尤其是(?)?Blebbistatin和通過所述方法獲得的肝細胞在誘導肝細胞體外擴增、構建生物人工肝和構建肝臟疾病模型中的應用。本發明的方法只需單個小分子或單因素處理，操作簡單，重復性好，并且在體外可高效進行，不涉及轉錄因子重編程技術和復雜的轉基因操作，能夠長期擴增，并且小分子擴增的肝細胞也仍然具有功能。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種誘導肝細胞體外擴增的方法。

背景技術

肝臟是人體內最大的內部器官，其是代謝的主要場所。肝細胞在肝臟中占85％。肝細胞在體內具有強大的再生潛能，將正常的肝臟切除三分之二后可以在僅一周內通過細胞增殖恢復到原來體積。然而，遺憾的是，盡管人類肝臟在體內可以迅速再生，但原代肝細胞在體外培養條件下僅能短暫增殖而不能長期增殖，到目前為止，努力在實驗室擴展人類肝細胞會導致代謝功能低的永生化癌細胞。人體肝細胞的稀缺和肝細胞擴展時功能喪失是科學、醫學和藥學發展的主要瓶頸，解決這一問題將有助于促進肝細胞體外藥物代謝、藥物毒性、終末期肝病細胞治療、構建出生物人工肝來支持等待移植的患者、疾病模型構建等研究和應用。

目前，該領域內最常用的方法為轉錄因子重編程技術，但是此類技術由于外源基因片段的插入使得進入臨床應用的風險較大。前期有研究發現，采用小分子重編程技術，中日兩個研究團隊分別成功地實現了原代肝細胞在體外向肝前體細胞的轉變和快速增殖，經定向誘導分化后，增殖的前體樣肝細胞可重新獲得成熟肝細胞的功能，移植入小鼠體內可達70％以上的整合。采用小分子化合物重編程技術，所得到的肝細胞未經過任何的基因改造，因而更為接近體內細胞的初始狀態，對于將來的臨床應用更為安全有效。該領域仍然存在使用小分子化合物來誘導肝細胞體外擴增的強烈需求。

發明內容

本發明人經過不斷的探索，意外地發現Myosin抑制劑能顯著地促進肝細胞長期擴增，進而實現上述目的。

因此，本發明總體上涉及Myosin抑制劑在誘導肝細胞體外擴增中的應用。

本發明還涉及Myosin抑制劑在構建生物人工肝中的應用。

本發明還涉及Myosin抑制劑在構建肝臟疾病模型中的應用。

優選地，所述Myosin抑制劑為(-)-Blebbistatin。

本發明還涉及一種誘導肝細胞體外擴增的方法，其特征在于，包括以下步驟：將肝細胞培養在培養基中，在培養基中加入Myosin抑制劑，繼續培養，從而誘導肝細胞體外擴增。優選地，所述Myosin抑制劑為(-)-Blebbistatin。

本發明還涉及通過所述方法獲得的肝細胞。

本發明還涉及包含所述肝細胞的試劑、生物人工肝、研究工具或診斷工具。

本發明還涉及使用所述誘導肝細胞體外擴增的方法或通過所述方法獲得的肝細胞的肝臟疾病模型。

本發明還涉及通過所述方法獲得的肝細胞在構建生物人工肝中的應用。

本發明還涉及通過所述方法獲得的肝細胞在構建肝臟疾病模型中的應用。

上述應用可以是治療性應用，也可以是非治療性應用。

本發明的方法只需單個小分子或單因素處理，操作簡單，重復性好，并且在體外可高效進行，不涉及轉錄因子重編程技術和復雜的轉基因操作，能夠長期擴增，并且小分子擴增的肝細胞也仍然具有功能。

本文中的術語的含義如下：

BMP4：骨形態發生蛋白4(bone morphogenetic protein，bmp4)。