[發明專利]一種基于免標記熒光增強的適配體DNA銀納米簇測定鉛離子的方法

有效

• 申請號: 201810082123.2
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN108458998B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 張保柱;魏春英
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 太原晉科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 鄭晉周

1.一種基于免標記熒光增強的適配體DNA銀納米簇測定鉛離子的方法，其特征在于：以鉛離子適配體的DNA-Ag NCs模板為識別原件，將鉛離子適配體的DNA-Ag NCs模板與標準濃度的鉛離子溶液混合于Tris-acetate緩沖液中加熱反應，隨后加入AgNO₃溶液混勻避光反應，再加入NaBH₄ 溶液避光反應，室溫下測定反應所獲得的溶液中標準濃度的鉛離子溶液的熒光值獲得標準曲線；將標準濃度的鉛離子溶液用待測樣品替換進行反應，并測定熒光值，結合標準曲線獲得待測樣品鉛離子濃度；

所述DNA-Ag NCs 模板的序列為5′-ctcctcctaccctttgtgggtagggcgggttggaaactcctcctaccc-3′，由48個堿基組成，其中兩端為銀納米簇成核富C序列，中間為鉛離子適配體富G序列部分，即鉛離子特異性識別的寡核苷酸，劃線部分ttt和aaa為成核富C序列和適配體富G序列的連接部分。

2.根據權利要求1所述的一種基于免標記熒光增強的適配體DNA銀納米簇測定鉛離子的方法，其特征在于：具體步驟如下：

（1）標準濃度鉛離子溶液與DNA-Ag NCs 模板混合：將DNA-Ag NCs 模板和標準濃度的Pb²⁺ 溶液在5mM，pH為7.0的Tris-acetate 緩沖液中混合，85℃加熱15min，自然冷卻到4℃，其中DNA-Ag NCs 模板和Pb²⁺ 溶液的濃度分別為0.3μM和0-500nM；

（2）加入AgNO₃進行反應：在步驟（1）所獲得的溶液中加入AgNO₃溶液混勻，在4℃下避光反應20min，然后加入新制的NaBH₄溶液充分攪拌1min，在4℃下避光反應1h獲得DNA-AgNCs；其中DNA-Ag NCs模板和AgNO₃、NaBH₄的最終濃度比為1:6:6；

（3）繪制標準曲線：室溫下測定步驟（2）所制備的加入相應標準濃度鉛離子溶液的熒光值，根據熒光值與濃度的對應關系繪制標準曲線；

（4）待測樣品的檢測：將標準濃度的鉛離子溶液用待測樣品替換，按照步驟（1）和（2）進行反應，制備含待測鉛離子的DNA-Ag NCs并測定其熒光值，結合標準曲線計算得到待測樣品鉛離子濃度。

3.根據權利要求2所述的一種基于免標記熒光增強的適配體DNA銀納米簇測定鉛離子的方法，其特征在于：步驟（2）所制備的DNA-Ag NCs的平均粒徑約為1nm。