[發明專利]一種高效抗癌細胞單克隆抗體的篩選方法在審

申請號：	201810081241.1	申請日：	2018-01-26
公開（公告）號：	CN107987165A	公開（公告）日：	2018-05-04
發明（設計）人：	裴新輝	申請（專利權）人：	裴新輝
主分類號：	C07K16/30	分類號：	C07K16/30;A61K39/395;A61P35/00;G01N33/577
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種高效抗癌細胞單克隆抗體篩選方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及分子生物學抗原抗體篩選技術領域，特別涉及一種高效抗癌細胞單克隆抗體的篩選方法。

背景技術

在目前的腫瘤的生物治療方案中，免疫治療是一直是研究和應用的熱點?？傮w上來說，目前主要有兩種主要的方式。一種是基于細胞免疫的，即讓殺傷性T細胞識別并殺傷癌細胞；另外一種是基于體液免疫的，即獲得腫瘤的特異性抗體，然后通過抗體激活補體途徑或通過偶聯在抗體上的藥物特異性殺傷癌細胞。但是不管哪種免疫療法，讓免疫系統識別癌細胞是最關鍵的一步。

但是癌細胞是一種逃逸了機體免疫監視的惡性增生細胞，它盡可能“偽裝”成正常細胞，以避免被機體免疫系統識別并清除，因此想要免疫系統識別癌細胞變的非常困難。

對于腫瘤抗體治療來說，最關鍵的步驟是獲得癌細胞特異性的單克隆抗體。目前主要有兩種方式獲得腫瘤特異性抗體：

第一種，直接用某種癌細胞或其提取物免疫小鼠或其它動物，并獲得抗該癌細胞的單抗，然通過用對照細胞(如對應的正常細胞)再對這些抗體進行負篩選，最終獲得特異性抗體；

第二種，首先通過分子生物學手段獲得癌細胞特異性的蛋白，尤其是膜蛋白，然后用這個蛋白去免疫并獲得單克隆抗體。

然而這兩種方法都有很多問題。如前所述，癌細胞是逃逸了免疫系統監控的細胞，所以雖然從分子尺度上來看，癌細胞的確與正常細胞有很多不同，但是這種不同并不足以激活機體的免疫系統。所以，如果用第一種方法獲得抗體，往往需要從幾千甚至幾萬個克隆中才能夠篩選到一個癌細胞特異性的抗體。也因為這種缺陷，這種方法已經基本被淘汰。第二種方法也是目前主流的方法，現有技術中已經通過這種方法獲得了一些抗體并獲得應用。

但是，并非一種腫瘤的癌細胞一定會表達這種抗原，即使在一個腫瘤組織內也不是所有的癌細胞都會表達某種特定的抗原。所以，這種抗體僅僅可以識別并殺傷表達這種抗原的癌細胞，而不表達這種抗原的癌細胞卻因此被篩選出來并惡性增生。癌細胞的這種高變異性也是癌癥難以治療的原因之一。

正因為癌細胞的多變性和多樣性，越來越多的業內專家認為，對于免疫療法來說，只有幾種或更多的抗體聯合治療，即“雞尾酒療法”才有可能解決這個問題。但是如前所述，通過目前主流的這兩種方法想獲得多種特異性的抗體是非常困難的。因此，如何盡可能高效地獲得腫瘤特異性的抗體，已經成為腫瘤抗體治療的瓶頸問題。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于，提供了一種高效抗癌細胞單克隆抗體的篩選方法。本發明方法獲得了11種抗肝癌細胞株HepG2的單克隆抗體。這些單抗對HepG2有特異性的識別，而不識別或基本不識別正常人肝細胞HH cell。同時，與其他組織來源的癌細胞相對比，這些單抗都對HepG2有特異性的識別。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種高效抗癌細胞單克隆抗體的篩選方法，包括以下步驟：用抗相對應的正常細胞或正常組織的抗體在體內直接去掉癌細胞或癌變組織與正常細胞或正常組織共有的抗原。

所述方法不在體外對抗原進行大規模篩選。

所述方法可以進一步包括：

A.獲得抗正常細胞或正常組織的血清；

B.用步驟A獲得的抗血清或純化出來的多克隆抗體處理動物；

C.用對應的癌細胞或癌變組織免疫步驟B處理過的動物；

D.分離步驟C處理后動物的B淋巴細胞，并與骨髓瘤細胞融合，獲得單克隆抗體細胞株；

E.用所述單克隆抗體細胞株制備單克隆抗體。