[發(fā)明專(zhuān)利]靶向CD19的嵌合抗原受體T細(xì)胞及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810078186.0
• 申請(qǐng)日: 2018-01-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108276497A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓德平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 英普樂(lè)孚生物技術(shù)（上海）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K19/00
• 分類(lèi)號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明公開(kāi)了一種靶向CD19的嵌合抗原受體T細(xì)胞及其應(yīng)用，用于制備嵌合抗原受體T細(xì)胞的嵌合抗原受體包含順序串聯(lián)的白介素2信號(hào)肽、抗CD19單鏈抗體、CD8蛋白分子絞鏈區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)信號(hào)結(jié)構(gòu)域及CD3ζ蛋白分子的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。該嵌合抗原受體T細(xì)胞應(yīng)用于制備治療血液惡性腫瘤的藥物或制劑；其中，血液惡性腫瘤包括CD19陽(yáng)性的急性B淋巴細(xì)胞白血病，彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向CD19的嵌合抗原受體T細(xì)胞及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

傳統(tǒng)的放、化療、手術(shù)、造血干細(xì)胞移植等治療方法延長(zhǎng)了部分血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者的生存時(shí)間，但是復(fù)發(fā)、難治甚至耐藥現(xiàn)象，仍是目前面臨的巨大挑戰(zhàn)。

近年來(lái)，細(xì)胞免疫治療因在腫瘤的腫瘤中取得了突破性進(jìn)展，成為血液系統(tǒng)等多種腫瘤治療的重要手段，被Science雜志列為2013年十大科學(xué)突破的首位。其中嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫治療進(jìn)展尤為突出。嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T)免疫治療技術(shù)是在體外通過(guò)基因工程技術(shù)修飾患者自體或異體T細(xì)胞成為表達(dá)嵌合抗原受體的嵌合抗原受體T細(xì)胞。嵌合抗原受體分子中包括一個(gè)能特異地識(shí)別癌細(xì)胞表面抗原蛋白的單鏈抗體(scFv)，嵌合抗原受體中的scFv賦予了嵌合抗原受體T細(xì)胞特異地識(shí)別癌細(xì)胞的能力，當(dāng)回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)后嵌合抗原受體T細(xì)胞就能特異性地殺死腫瘤細(xì)胞。嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫治療具有特異性強(qiáng)，安全性高，能長(zhǎng)期有效控制甚至完全治愈腫瘤，是腫瘤治療技術(shù)的重大突破。CD19抗原特異性表達(dá)于正常B細(xì)胞、B細(xì)胞前體細(xì)胞以及B系血液腫瘤細(xì)胞表面，而造血干細(xì)胞及非造血細(xì)胞則不存在CD19表達(dá)，因此針對(duì)CD19的細(xì)胞T細(xì)胞能特異地殺傷表達(dá)CD19惡性B細(xì)胞腫瘤。

過(guò)繼性免疫細(xì)胞治療(adoptive T-cell therapy，ACT)通過(guò)回輸自體或經(jīng)腫瘤特異性誘導(dǎo)的T細(xì)胞，在治療一些到目前為止用其它手段幾乎難以治愈的轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤如黑色素瘤方面取得重大成功；但由于回輸T細(xì)胞在體內(nèi)活性持續(xù)較短、缺乏腫瘤特異性及療效不確切等諸多問(wèn)題，在臨床應(yīng)用上受到限制。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)過(guò)繼性細(xì)胞治療中回輸T細(xì)胞的這些不足，本發(fā)明提供了一種能夠特異性地抑制、殺傷CD19惡性B細(xì)胞腫瘤的靶向CD19的嵌合抗原受體T細(xì)胞及其應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首先提供了一種用于制備靶向CD19的嵌合抗原受體T細(xì)胞的嵌合抗原受體，具體采用了以下技術(shù)方案：

一種靶向CD19的嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體包含順序串聯(lián)的白介素2信號(hào)肽、抗CD19單鏈抗體、CD8蛋白分子絞鏈區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和CD3ζ蛋白分子的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；

所述抗CD19單鏈抗體包括重鏈可變區(qū)、輕重鏈連接區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述輕重鏈連接區(qū)的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示；所述嵌合抗原受體的N-端以白介素2信號(hào)肽跟抗CD19單鏈抗體的重鏈可變區(qū)連接；

所述胞內(nèi)信號(hào)結(jié)構(gòu)域與跨膜區(qū)來(lái)自同一信號(hào)蛋白分子，所述的信號(hào)蛋白分子選自CD27、CD28、人腫瘤壞死因子受體9、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3或者與CD83特異性結(jié)合的配體。

優(yōu)選的，所述白介素2信號(hào)肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

優(yōu)選的，所述CD8蛋白分子鉸鏈區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

優(yōu)選的，所述CD3ζ蛋白分子胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(或者刺激信號(hào)釋放區(qū))的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。