[發(fā)明專利]一種用于鑒定中藥麝香的PCR方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810076314.8 | 申請日： | 2018-01-26 |
| 公開（公告）號： | CN108048544B | 公開（公告）日： | 2021-01-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 袁媛;蔣超;趙玉洋;周駿輝;黃璐琦 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6869 | 分類號： | C12Q1/6869;C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 關(guān)暢;張立娜 |
| 地址： | 100700 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 鑒定 中藥 麝香 pcr 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種用于鑒定中藥麝香的PCR方法。該方法包括：從待測中藥樣品中提取基因組DNA作為模板，采用引物對(SEQ ID No.1和SEQ ID No.2)進行PCR擴增；對所得PCR產(chǎn)物進行測序；將測序序列與標(biāo)準(zhǔn)序列進行比較，如果測序序列與所述標(biāo)準(zhǔn)序列完全一致或者僅有1個核苷酸的差異，則待測中藥樣品為麝香；或者以測序序列和標(biāo)準(zhǔn)序列構(gòu)建NJ樹，如果測序序列與標(biāo)準(zhǔn)序列在NJ樹的同一個分枝上，則待測中藥樣品為麝香。本發(fā)明所建立的用于鑒定中藥麝香的PCR方法快速、準(zhǔn)確、科學(xué)性強且使用方便，對于確保藥材市場中麝香的質(zhì)量及其臨床療效具有重要意義。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥鑒定領(lǐng)域，涉及一種用于鑒定中藥麝香的PCR方法。
背景技術(shù)
麝香是麝科動物林麝Moschus berezovskii Flerov.,馬麝M.sifanicusPrzewalski或原麝M.moschiferus L.成熟雄性香囊的干燥分泌物。收載于2015年及即將實施的2020年版《中國藥典》。麝香具有開竅，通經(jīng)絡(luò)，消腫止痛的功效，臨床用于邪蒙心竅、神志昏迷，功效卓著。
由于麝香來源極其有限,市場銷售價格昂貴，所以市場上出現(xiàn)較多的偽品和摻雜品，常見的有鼠科動物麝鼠Ondatra zibethicus Linnaeus的麝鼠香，也有摻入雞Gallusgallus Linnaeus的血塊，羊Ovis aries Linnaeus的糞便，牛內(nèi)臟等動物的組織和分泌物的摻偽品。為保證用藥安全有效，需對其進行真?zhèn)舞b別。且不同種來源的麝香價格具有差異，應(yīng)用也有不同。目前雖然有很多生藥學(xué)的方法對麝香進行鑒定，但均難以準(zhǔn)確鑒別麝香來源于哪種麝的基原物種。此外，也有研究表明可采用DNA條形碼技術(shù)對麝香的原動物進行鑒別，但只能鑒定麝的肌肉、組織或毛發(fā)，均無法從麝香(即麝的分泌物)中獲得DNA片段或?qū)ζ溥M行PCR擴增，無法對中藥麝香進行鑒別。
為確保藥材市場中麝香的質(zhì)量及其臨床療效，需要建立快速、準(zhǔn)確、科學(xué)性強、使用方便的方法進行鑒定。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于鑒定中藥麝香的PCR方法。
第一，本發(fā)明要求保護一種用于鑒定中藥麝香的PCR方法。
本發(fā)明所提供的用于鑒定中藥麝香的PCR方法，可包括如下步驟：
(a)從待測中藥樣品中提取基因組DNA作為模板，采用引物對進行PCR擴增，得到PCR產(chǎn)物；
所述引物對為如下(a1)或(a2)所示的引物對：
(a1)由SEQ ID No.1所示的上游引物和SEQ ID No.2所示的下游引物組成的引物對；
(a2)由(a1)中的上游引物和/或下游引物經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列組成的，且與(a1)中所述引物對功能相同的引物對；
(b)對步驟(a)所得PCR產(chǎn)物進行測序，獲得測序序列；
(c)按照如下(c1)或(c2)確定所述待測中藥樣品是否為麝香：
(c1)將所述測序序列與標(biāo)準(zhǔn)序列進行比較，如果所述測序序列與所述標(biāo)準(zhǔn)序列完全一致或者僅有1個核苷酸的差異，則所述待測中藥樣品為或候選為麝香；反之，則所述待測中藥樣品不為或候選不為麝香；
(c2)以所述測序序列和所述標(biāo)準(zhǔn)序列為數(shù)據(jù)源，構(gòu)建NJ樹，如果所述測序序列與所述標(biāo)準(zhǔn)序列在NJ樹的同一個分枝上，則所述待測中藥樣品為或候選為麝香；反之，則所述待測中藥樣品不為或候選不為麝香；
所述標(biāo)準(zhǔn)序列選自如下任一：SEQ ID No.3所示核苷酸序列(對應(yīng)馬麝)、SEQ IDNo.4所示核苷酸序列(對應(yīng)林麝)、SEQ ID No.5所示核苷酸序列(對應(yīng)原麝)。
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