[發明專利]用于糖蛋白檢測的硼酸鹽及其制備方法

在審

• 申請號: 201810075775.3
• 申請日: 2018-01-26
• 公開（公告）號: CN108191900A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 蘇宏文;賴華;劉志文;梁偉業
• 申請（專利權）人: 廣東優尼德生物科技有限公司;賽馳生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C07F5/02
• 分類號: C07F5/02;C09K11/02;A61K49/00
• 代理公司: 上海點威知識產權代理有限公司 31326
• 代理人: 許曉琳

本發明公開了一種用于糖蛋白檢測的硼酸鹽，具體為6?羧基?4',5'?二氯?2',7'?二甲氧基熒光素苯硼酸鹽，其制備方法包括如下步驟：將2?氯?4?甲氧基?1,3?苯二酚和偏苯三酸酐反應制得4,5?二氯?2,7?二甲氧基?6?羧酸?熒光素，然后將4,5?二氯?2,7?二甲氧基?6?羧酸?熒光素與間氨基苯硼酸反應制得6?羧基?4',5'?二氯?2',7'?二甲氧基熒光素苯硼酸鹽。本發明硼酸鹽能特異性結合糖化血紅蛋白，具有結構穩定，靈敏度高等優點，可應用于人體糖蛋白的檢測。

技術領域

本發明涉及糖蛋白檢測領域，具體涉及一種用于糖蛋白檢測的硼酸鹽及其制備方法。

背景技術

糖蛋白是含糖的蛋白質，由寡糖鏈與肽鏈中的一定氨基酸殘基以糖苷鍵共價連接而成。其主要生物學功能為細胞或分子的生物識別，如卵子受精時精子需識別卵子細胞膜上相應的糖蛋白。受體蛋白、腫瘤細胞表面抗原等亦均屬糖蛋白。糖蛋白普遍存在于動物、植物及微生物中，種類繁多，功能廣泛。可按存在方式分為三類:1、可溶性糖蛋白，存在于細胞內液、各種體液及腔道腺體分泌的粘液中。血漿蛋白除白蛋白外皆為糖蛋白?？扇苄蕴堑鞍装?如核酸酶類、蛋白酶類、糖苷酶類)、肽類激素(如絨毛膜促性腺激素、促黃體激素、促甲狀腺素、促紅細胞生成素)、抗體、補體、以及某些生長因子、干擾素、抑素、凝集素及毒素等。2、膜結合糖蛋白，其肽鏈由疏水肽段及親水肽段組成。疏水肽段可為一至數個，并通過疏水相互作用嵌入膜脂雙層中。親水肽段暴露于膜外。糖鏈連接在親水肽段并有嚴格的方向性。在質膜表面糖鏈一律朝外；在細胞內膜一般朝腔面。膜結合糖蛋白包括酶、受體、凝集素及運載蛋白等。此類糖蛋白常參與細胞識別，并可作為特定細胞或細胞在特定階段的表面標志或表面抗原。3、結構糖蛋白，為細胞外基質中的不溶性大分子糖蛋白，如膠原及各種非膠原糖蛋白(纖粘連蛋白、層粘連蛋白等)。它們的功能不僅僅是作為細胞外基質的結構成分起支持、連接及緩沖作用，更重要的是參與細胞的識別、粘著及遷移，并調控細胞的增殖及分化。

寡糖鏈通常指由2-10個單糖基借糖苷鍵連成的聚合體。糖蛋白的寡糖鏈多有分枝。由于單糖的端基碳(異頭碳)原子有α、β兩種構型，而且單糖分子中存在多個可形成糖苷鍵的羥基，因此，糖鏈結構的多樣性超過多核苷酸及肽鏈。在糖鏈結構中可以貯存足夠的識別信息，從而在分子識別及細胞識別中起決定性作用。糖蛋白參與的生理功能包括凝血、免疫、分泌、內吞、物質轉運、信息傳遞、神經傳導、生長及分化的調節、細胞遷移、細胞歸巢、創傷修復及再生等。糖蛋白的糖鏈還參與維持其肽鏈處于有生物活性的天然構象及穩定肽鏈結構，并賦予整個糖蛋白分子以特定的理化性質(如潤滑性、粘彈性、抗熱失活、抗蛋白酶水解及抗凍性等)。

糖蛋白與很多疾病如感染、腫瘤、心血管病、肝病、腎病、糖尿病以及某些遺傳性疾病等的發生、發展有關。再者，細胞表面的糖蛋白及糖脂可脫落到周圍環境或進入血循環，它們可以作為異常的標志為臨床診斷提供信息；患某些疾病時體液中的糖蛋白亦常有特異性或強或弱的改變,這可有助于診斷或預后的判斷。

歐洲專利EP0772779B1公開了一種糖蛋白檢測方法，其利用硼酸鹽與糖蛋白的特異性結合這一基本特征，設計帶有特定吸收和激發熒光基團的硼酸鹽化合物，并具體公開了采用通式為F-A-B(OH)₂的化合物作為上述檢測試劑。其中F是熒光素，A是-NH-CS-NH-Ph-基團，用以連接熒光素和硼酸基團，其化學結構式如下：

特異性結合糖蛋白的是化合物上的硼酸基團。在特定波長的激發下，該硼酸鹽化合物中的熒光基團被激發產生熒光信號。當該硼酸鹽化合物結合糖蛋白后，在特定波長激發下，其產生的熒光因能量傳導被淬滅而不再產生熒光。這種淬滅效應隨著體系中糖蛋白含量的升高而增強。利用此原理，可設計檢測體系，通過監測熒光強度的變化，定量檢測人體糖蛋白的含量。然而，該硼酸鹽化合物存在如下問題：1、其激發光和吸收光波長較短，容易相互干擾，影響檢測精度。2、該硼酸鹽的熒光強度較弱，檢測靈敏度和準確度有待進一步提高。

發明內容